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第9章 酶促反应动力学 一、化学动力学基础 化学反应的两个基本问题： 反应进行的方向、可能性和限度 反应进行的速率和反应机制 （一）反应速率及其测定 ——以单位时间内反应物或生成物 浓度的改变来表示。 单分子反应 A P v = kc c：A反应物的浓度（mol/l） k：比例常数/反应速率常数 双分子反应 A + B P + Q v = kc1c2 c1、c2 ：A和B反应物浓度（mol/l） k：比例常数/反应速率常数 ——可通过v与c的关系推断反应机制。 2.反应级数 根据总反应速率与反应物浓度的关系： 能以v = kc表示，为一级反应； 能以v = kc1c2表示，则为二级反应； v 与反应物浓度无关，则为零级反应。 复杂反应由一连串简单反应组成，确定反应级数比较复杂，且不一定是整数。实际上为各个反应物浓度指数的总和。 反应分子数和反应级数为两个不同概念 反应分子数：实际参加反应的分子数，是一个反应机制的问题。 反应级数：由实验测得，表示反应速率与反应物浓度间的关系问题。实际应用时常采用反应级数。 （三）各级反应的特征 1.一级反应： 反应速率与反应物浓度的一次方成正比。 v = kc 实验所得酶促反应过程中各种浓度与时间关系曲线 稳态时ES浓度不变 反应速度 V=k3[ES] ES的生成速度=消耗速度 k1[E][S]=k2[ES] + k3[ES] E的质量平衡方程 [E]=[Et] - [ES] a.当[S]很小时 V=V [S]/Km =k[S] 一级反应 Km=? Km = [S] ①Km是酶的特性常数： Km的大小只与酶的性质有关，与酶浓度无关。随测定的底物、pH 、温度、离子强度而改变。酶在一定条件下催化都有特定的Km值，可以鉴定酶。 蔗糖酶米氏常数（Km）的测定 1. 配12支蔗糖底物溶液，浓度分别为0、0.005、0.00625、0.0075、0.00875、0.010、0.0125、0.015、0.02、0.025、0.0375、0.050M，在35℃水浴保温； 2. 加入3U/ml已在35 ℃水浴保温的酶溶液，准确作用5分钟，终止反应； 3. 各吸取0.5ml反应液与3，5-二硝基水杨酸，沸水浴5分钟，冷却后在540nm测定吸光度OD值； 4. 作图 3.双底物反应的动力学方程 （1）序列机制的底物动力学方程及动力学图 （2）乒乓机制的底物动力学方程及动力学图 （一）抑制程度的表示方法 1.相对活力分数（残余活力分数） 3.抑制分数 ——指被抑制而失去活力的分数 依据： 能否用透析、超滤等物理方法 除去抑制剂，使酶复活。 1、不可逆抑制作用 ： 抑制剂与酶必需基团以牢固的共价键结合而引起酶活力丧失，不能用透析，超滤等物理方法除去抑制剂而使酶复活。不可逆抑制也是酶的修饰抑制。 很多为剧毒物质可造成不可逆抑制，如： 高浓度重金属盐，有机磷、有机汞、有机砷、 氰化物、青霉素、毒鼠强等。 抑制剂与酶以非共价键结合而引起酶活力降低或丧失，抑制作用可通过透析等方法除去。 （1）竞争性（Competitive)抑制 竞争性：I与S与酶活性中心结合机会均等 V下降发生抑制 Km不变 亲和力不受影响 Vmax减小 不可逆抑制剂 如何紧急救治？ 排毒 洗胃、喝鸡蛋清牛奶 导泄、利尿 血液透析（清除游离状态毒物） 解毒药：解磷定 ②有机汞、有机砷化合物 ——与酶分子中-SH作用； 可通过加入过量巯基化合物如半胱氨酸或还原型谷胱甘肽（GSH）而解除。 ? H2N-CH-COOH ? CH2 ? SH ⑤氰化物、硫化物和CO ——与酶中金属离子形成稳定的络合物 如氰化物与含铁卟啉细胞色素氧化酶结合 ⑥青霉素（penicillin） 与细菌糖肽转肽酶