比色分析及光光度法.ppt

第 七 章比色分析及分光光度法Colorimetry and Spectrophotometry 基本内容和重点要求 掌握物质对光的选择性吸收、吸光度和透光度、朗伯—比尔定律及摩尔吸光系数等知识 了解比色分析和分光光度法的特点、基本原理、仪器构造和各部件的作用 学习掌握显色反应和显色条件的选择 理解掌握 分光光度法定量分析中的各种影响因素 本章内容提要 §7.1 概述 §7.2 物质对光的选择性吸收 §7.3 光吸收基本定律 §7.4 比色分析和分光光度法及其仪器 §7.1 概述 方法依据及分类 方法特点 一、方法依据及分类 基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法，包括比色法、可见?及紫外光度法及红外光谱法等。 比色分析法：通过目视比较颜色的深浅来测定物质的浓度。 分光光度法：使用分光光度计测定的方法。 二、分光光度法的特点 灵敏度高、选择性好 准确度较高 应用广泛 仪器简单、操作简便、分析快速 §7.2 物质对光的选择性吸收 光的基本性质 物质对光的选择性吸收 一、光的基本性质 光的波动性和微粒性： 2. 电磁波谱图 3. 单色光与复合光 单色光：具有同一波长的光 复合光：不同波长组成的光 可见光的波长大约在400～760nm之间，由红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等各种色光按一定比例混合而成，各种光具有一定的波长范围。 4. 互补光 二、物质对光的选择性吸收 1. 物质颜色和吸收颜色的关系 2. 吸收光谱图 3. 分析依据 定性分析：最大吸收波长?max 定量分析：吸光度大小 §7.3 光吸收基本定律 透光率与吸光度 朗伯－比尔定律 吸光系数、摩尔吸光系数 吸光度的加合性 标准曲线（校正曲线） 一、透光率与吸光度 Transmittance and absorptivity 透光率T与吸光度A的关系 二、朗伯—比尔定律 Lambert-Beer’s Law 三、吸光系数、摩尔吸光系数 吸光系数a： 摩尔吸光系数?： 关系： e＝ M a 例 1 50mL比色管中，加入含有0.025mg的Fe2+溶液，加入邻二氮菲显色剂，用水稀释至50mL，用2cm比色池，在分光光度计上测得吸光度A=0.190，计算摩尔吸光系数?？ 解： 四、吸光度的加合性 多组分体系中 五、标准曲线（校正曲线） Standard curve，calibrated curve，working curve §7.4 比色分析和分光光度法及其仪器 目视比色法 分光光度法 一、目视比色法（ colorimetry ） 方法依据 方法特点 二、分光光度法 Spectrophotometry 分光光度计 基本部件 光源： 在可见光和近红外光区，常用钨灯或碘钨灯作光源，它们辐射320－2500nm波长的光；在近紫外区，常使用氢灯或氘灯，它们能辐射180－375nm波长的光。 单色器： 棱镜－用光学玻璃或石英制成。 光栅－光通过光栅发生衍射和干涉现象而分光。 棱镜：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同 光栅：在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、1200、2400条/mm )。 吸收池：由无色透明的光学玻璃或石英制成。 检测器：硒光电池、光电管或光电倍增管。 显示系统： 检流计、记录仪、数字显示器、电脑等 检测器 光电管 光电倍增管 §7.2 光度分析法的设计 显色反应 显色条件的选择 测量波长和吸光度范围的选择 参比溶液的选择 标准曲线的制作 一、显色反应 Color reaction 待测物质本身有较深的颜色，直接测定；待测物质是无色或很浅的颜色，需要选适当的试剂与被测离子反应生成有色化合物再进行测定，此反应称为显色反应，所用的试剂称为显色剂（color reagent）。 按显色反应的类型来分，主要有氧化还原反应和络合反应两大类，而络合反应是最主要的。 显色反应的选择 选择性好，干扰少，或干扰容易消除；灵敏度高，有色物质的ε应大于104。 有色化合物的组成恒定，符合一定的化学式。 有色化合物的化学性质稳定，至少保证在测量过程中溶液的吸光度基本恒定。这就要求有色化合物不容易受外界环境条件的影响。 有色化合物与显色剂之间的颜色差别要大，即显色剂对光的吸收与络合物的吸收有明显区别，要求两者的吸收峰波长之差Δλ（称为对比度）大于60 nm。 显色剂 无机显色剂不多，因为生成的络合物不稳定，灵敏度和选择性也不高。如用KSCN显色测铁、钼、钨和铌；用钼酸铵显色测硅、磷和钒等。 有机显色剂分子中含有生色团和助色团。 生色团（chromophoric group）：某些含不饱和键的基团，如偶氮基、对醌基和羰基等。这些基团中的π电子被激发时需能量较小，可吸收波长200nm以上的可见光而显色。 助色团（au