比色分析及光光度法.ppt

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第 七 章 比色分析及分光光度法 Colorimetry and Spectrophotometry 基本内容和重点要求 掌握物质对光的选择性吸收、吸光度和透光度、朗伯—比尔定律及摩尔吸光系数等知识 了解比色分析和分光光度法的特点、基本原理、仪器构造和各部件的作用 学习掌握显色反应和显色条件的选择 理解掌握 分光光度法定量分析中的各种影响因素 本章内容提要 §7.1 概述 §7.2 物质对光的选择性吸收 §7.3 光吸收基本定律 §7.4 比色分析和分光光度法及其仪器 §7.1 概述 方法依据及分类 方法特点 一、方法依据及分类 基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法,包括比色法、可见?及紫外光度法及红外光谱法等。 比色分析法:通过目视比较颜色的深浅来测定物质的浓度。 分光光度法:使用分光光度计测定的方法。 二、分光光度法的特点 灵敏度高、选择性好 准确度较高 应用广泛 仪器简单、操作简便、分析快速 §7.2 物质对光的选择性吸收 光的基本性质 物质对光的选择性吸收 一、光的基本性质 光的波动性和微粒性: 2. 电磁波谱图 3. 单色光与复合光 单色光:具有同一波长的光 复合光:不同波长组成的光 可见光的波长大约在400~760nm之间,由红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等各种色光按一定比例混合而成,各种光具有一定的波长范围。 4. 互补光 二、物质对光的选择性吸收 1. 物质颜色和吸收颜色的关系 2. 吸收光谱图 3. 分析依据 定性分析:最大吸收波长?max 定量分析:吸光度大小 §7.3 光吸收基本定律 透光率与吸光度 朗伯-比尔定律 吸光系数、摩尔吸光系数 吸光度的加合性 标准曲线(校正曲线) 一、透光率与吸光度 Transmittance and absorptivity 透光率T与吸光度A的关系 二、朗伯—比尔定律 Lambert-Beer’s Law 三、吸光系数、摩尔吸光系数 吸光系数a: 摩尔吸光系数?: 关系: e= M a 例 1 50mL比色管中,加入含有0.025mg的Fe2+溶液,加入邻二氮菲显色剂,用水稀释至50mL,用2cm比色池,在分光光度计上测得吸光度A=0.190,计算摩尔吸光系数?? 解: 四、吸光度的加合性 多组分体系中 五、标准曲线(校正曲线) Standard curve,calibrated curve,working curve §7.4 比色分析和分光光度法 及其仪器 目视比色法 分光光度法 一、目视比色法( colorimetry ) 方法依据 方法特点 二、分光光度法 Spectrophotometry 分光光度计 基本部件 光源: 在可见光和近红外光区,常用钨灯或碘钨灯作光源,它们辐射320-2500nm波长的光;在近紫外区,常使用氢灯或氘灯,它们能辐射180-375nm波长的光。 单色器: 棱镜-用光学玻璃或石英制成。 光栅-光通过光栅发生衍射和干涉现象而分光。 棱镜:依据不同波长光通过棱镜时折射率不同 光栅:在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、1200、2400条/mm )。 吸收池:由无色透明的光学玻璃或石英制成。 检测器:硒光电池、光电管或光电倍增管。 显示系统: 检流计、记录仪、数字显示器、电脑等 检测器 光电管 光电倍增管 §7.2 光度分析法的设计 显色反应 显色条件的选择 测量波长和吸光度范围的选择 参比溶液的选择 标准曲线的制作 一、显色反应 Color reaction 待测物质本身有较深的颜色,直接测定;待测物质是无色或很浅的颜色,需要选适当的试剂与被测离子反应生成有色化合物再进行测定,此反应称为显色反应,所用的试剂称为显色剂(color reagent)。 按显色反应的类型来分,主要有氧化还原反应和络合反应两大类,而络合反应是最主要的。 显色反应的选择 选择性好,干扰少,或干扰容易消除;灵敏度高,有色物质的ε应大于104。 有色化合物的组成恒定,符合一定的化学式。 有色化合物的化学性质稳定,至少保证在测量过程中溶液的吸光度基本恒定。这就要求有色化合物不容易受外界环境条件的影响。 有色化合物与显色剂之间的颜色差别要大,即显色剂对光的吸收与络合物的吸收有明显区别,要求两者的吸收峰波长之差Δλ(称为对比度)大于60 nm。 显色剂 无机显色剂不多,因为生成的络合物不稳定,灵敏度和选择性也不高。如用KSCN显色测铁、钼、钨和铌;用钼酸铵显色测硅、磷和钒等。 有机显色剂分子中含有生色团和助色团。 生色团(chromophoric group):某些含不饱和键的基团,如偶氮基、对醌基和羰基等。这些基团中的π电子被激发时需能量较小,可吸收波长200nm以上的可见光而显色。 助色团(au

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