发光免疫检技术的临床应用.docVIP

由于化学反应（通常是氧化）产生电子能级处于激发态的物质，后者通过跃迁释放能量产生光子，从而导致的发光现象。 生物发光和化学发光均属于冷光，即发光不是由于发光体温度升高所至，发射波长也与其温度无关。 分类： 按化学反应类型 酶促化学发光： 辣根过氧化物酶系统 碱性磷酸酶系统 黄嘌呤氧化酶系统 非酶促化学发光： 吖啶酯系统 草酸酯系统 三价铁-鲁米诺系统 按发光持续时间 闪光（Flash）: 发光时间在数秒内，如吖啶酯 以原位进样(In Situ Injector) 和时间积分法测量 辉光（Glow）: 发光时间在数十分钟以上，如： HRP-Luminol系统 AP-AMPPD系统 黄嘌呤氧化酶系统 无须原位进样、 以速率法测量。 辉光和闪光区别： 光生物学检测技术的优越性:1、彻底消除了放射性危害2、无半衰期限制，试剂稳定性和有效期大大延长3、容易实现连续、动态、重复测定4、适合于复合标记系统进行多指标并行测定5、操作简单，反应速度快，容易实现自动化6、灵敏度和线性范围超过以往技术 几种标记/检测技术灵敏度的比较 几种标记/检测技术线性范围的比较 几种标记/检测试剂的有效期比较 三种免疫测定技术的成本及费用 免疫分析技术基本原理：利用抗原、抗体之间的特异性结合来测定、分析特定物质的方法抗原：可诱导动物免疫系统产生免疫应答的物质。抗体：由动物免疫系统产生，可特异性结合某种物质的球蛋白。 免疫测定技术分类 双抗体夹心法（三明志法）原理 夹心法的剂量--反应关系曲线 竞争法的原理 竞争法的剂量--反应关系曲线 间接法原理 俘获法原理 双抗原夹心法原理 间接包被夹心法原理 发光免疫分析基本操作步骤（一步法） 发光免疫分析基本操作步骤（二步法） 免疫分析结果的干扰因素 免疫源性胰岛素与真胰岛素、HCG、性激素等采用不同的单抗或多抗时检测结果也有较大差异。（单抗特异性好，受干扰小，因此测值低），不同厂家产品测定结果之间一致性差（未与国家标准品比对）。所使用的内建标准曲线结合校正的方法不尽完善。部分产品不显示原始数据，无法监控其准确性。 使用商品化发光免疫分析产品必须做好的几个工作在厂家提供的数据基础上，自行建立正常参考值系统。 明确各个试剂盒的特异性及交叉反应情况，如：小分子激素之间，以及与自身前体或代谢物之间的交叉胰岛素与C-肽、胰岛素原之间的交叉FSH、LH、HCG之间的交叉。充分利用现有国标参考品校正结果（注意防腐剂干扰）（可以从国家药品生物制品检定所或临床检验中心得到）自行建立多点质控（2-3点）监控每次实验的准确性。 尽可能避免干扰因素。①、采样：清洁样品管（防止还原剂干扰）、不使用酶抑制剂、及时送检；②、实验室：恒温、避免强光和强磁场、严格操作规程、及时维护、报修。 正常值参考的意义及灰色区域的存在 自身基础数据——最佳“正常参考值” 检验医师给临床所提供的一切服务仅限于：①保证检验结果准确性的；②对该检验项目或其检验结果普遍意义的解释；③建立和完善实验室面向临床大夫乃至患者的咨询制度；④不要试图替临床大夫为某一具体病例作出最终诊断。 化验结果与临床不符的原因