植物NADH氧化酶活性比色法定量检测试剂盒.docVIP

GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS50096.3 v.A GENMED植物NADPH氧化酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 GENMED植物NADPH氧化酶活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用特异性抑制剂，通过反应系统测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化后峰值的降低，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种植物组织，包括种子（seed）、叶片（leaf）、根（root）、胚胎叶（cotyledon）、上胚轴（epicotyl）等还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（NADPH氧化酶）的特异活性检测。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。 技术背景 NADPH氧化酶，通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase；NADPH oxidase；EC）或还原型辅酶II氧化酶，是机体防御机制中的重要元素。NADPH氧化酶由6个亚体构成：Rho GTP酶（Rho guanosine triphosphatase）和5个phox（吞噬细胞氧化酶；phagocytic oxidase）。其中主要包含细胞膜嵌合蛋白质分子（gp91phox、p22phox、flavocytochrome b558等），以及位在细胞质内的蛋白质分子（p47phox、p67phox、p40phox、Rac1、Rac2等）。其最特征性的酶活性是超氧化物歧化酶敏感的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶。细胞膜上的NADPH氧化酶被激活，将还原型辅酶Ⅱ（NADPH）转变为氧化型辅酶Ⅱ（NADP），氧分子则获得电子形成超氧阴离子O2-，由O2-又可生成H2O2和OH－。植物有氧代谢（呼吸、光合成等）过程中具有活性氧信号调节作用的NADPH氧化酶，与哺乳动物的gp91phox等同源。NADPH氧化酶在植物细胞（根部、下胚轴hypocotyl、毛状体trichome等）生长、植物发育（尖端生长根毛tip growing root hairs、花粉管pollen tube等）具有重要作用，同时调节细胞壁松软、植物免疫、非生命性应急反应和适应的功能。基于底物还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH），在特异性抑制剂联苯基三价碘（diphenyleneiodonium；DPI）的存在下，受到NADPH氧化酶的催化作用，转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP），产生吸光峰值的变化，通过分光光度仪（340nm波长）检测，来测定NADPH氧化酶的特异活性。其反应方式为： NADPH Oxidase NADPH + O2 + FAD → NADP－ + FADH2 + O2－ 产品内容 GENMED清理液（Reagent A） 30毫升 GENMED裂解液（Reagent B） 5毫升 GENMED缓冲液（Reagent C） 20毫升 GENMED反应液（Reagent D） 2.5毫升 GENMED阴性液（Reagent E） 2毫升 GENMED底物液（Reagent F） 500微升 GENMED专性液（Reagent G） 200微升 产品说明书 1份 保存方式 保存GENMED清理液（Reagent A）和GENMED阴性液（Reagent E）在4℃冰箱里，其余的保存在在－20℃冰箱里，避免反复冻融；GENMED反应液（Reagent D）和GENMED底物液（Reagent F），避免光照，有效保证6月 用户自备 15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器 1.5毫升离心管：用于样品操作和保存的容器 4℃（微型）台式离心机：用于样品处理 恒温培养箱或恒温水槽：用于反应物孵育 比色皿：用于比色测定的容器 分光光度仪：用于比色分析 实验步骤 实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂溶液置入冰槽里融化；GENMED反应液（Reagent D）和GENMED底物液（Reagent F）注意避光。然后进行下列操作。 一、样品准备 准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定1克组织重量 （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管 （选择步骤）加入3毫升GENMED清理液（Reagent A）清洗1