虎奶菇液体酵条件的研究.docVIP

虎奶菇液体发酵条件的研究 陈济琛林戎斌蔡海松 虎奶菇是一种尚未开发的珍稀药用菌，产于亚洲热带地区﹑澳大利亚和非洲，中国主要分布在云南省的腾冲﹑章凤等地。菌物学家鉴定，虎奶菇隶属担子菌亚门﹑层菌纲、伞菌目、侧耳科、侧耳属（平菇属），学名为Pleurotus tuber-regium（Fr.）Sing（1951年）。据报道虎奶菇富含蛋白质、多糖等活性物质和钾、钙、镁等矿质元素, 具有较高的营养价值和药用价值。非洲一些国家用虎奶菇治疗胃病、糖尿病、冠心病、高血压等疾病，南洋各国用虎奶菇菌核治疗痢疾。虎奶菇菌核入药，外敷有治疗妇女乳腺炎之效。 利用液体发酵技术生产食用菌菌丝体并开发相关产品已得广泛应用。关于虎奶菇液体发酵的报道却很少，对此我们在引种栽培虎奶菇之后对其液体发酵进行深入研究，现将结果报道如下。 1 材料与方法 1.1　材料 1.1.1 菌株：虎奶菇（Pleurotus tuber-regium）引自福建三明真菌研究所。 1.1.2 斜面培养基：PDA综合培养基。 1.1.3 液体培养基：黄豆粉1%、葡萄糖2%，pH自然。黄豆粉煮30 min ，4800 r/min离心30 min。 1.2 方法 1.2.1 接种与培养：250ml三角瓶装100ml液体培养基，接种斜面菌种1cm2两块，置30℃、 160r／min摇床培养7ｄ，得到一级种。取菌球研磨破碎后，加入60ml无菌水振荡均匀，按1%接种量接入液体培养基，培养7ｄ后收集菌丝体。 1.2.2　液体发酵条件确定：250 ml三角瓶装液体培养基，按培养温度20℃、24℃、28℃、20℃、32℃、36℃、40℃，起始pH３、4、5、6、7、8、9，摇瓶装量60、80、100、120、140 ml，摇床转速80、120、160、200、240 r/min，接种量1%、2%、5%、10%、15%，分５组进行，５个重复。 1.2.3 菌丝干重的测定：发酵液经60目筛过滤，收集菌丝体，60℃烘干至恒重。以每100ml发酵液中菌丝体干重（mg/100ml）计。 1.2.4 L9（34）正交试验：根据前期碳氮源单因素试验的结果，选择最佳的氮源黄豆粉、碳源葡萄糖，促生长因子酵母粉、无机盐及pH调节因子磷酸二氢钾，按L9（34）设计四因素三水平试验，9个组合，5个重复。试验因素和水平见表1。 基金项目：福建省自然科学基金项目（B0310024） *作者简介：陈济琛（1964-），男，副研究员。研究方向：农业微生物与食用菌。 表1 试验因子及水平 Table 1 Factors and levels of the trial 水平 黄豆粉 A 葡萄糖B 酵母粉 C 磷酸二氢钾 D 1 0.5 1.0 0.1 0.1 2 1.0 2.0 0.2 0.2 3 1.5 3.0 0.3 0.3 2 结果与讨论 2.1　培养温度对菌丝产量的影响 表2结果表明，培养温度从20℃升至28℃的过程中，菌丝产量不断增加，28℃菌丝产量达最高值1067 mg/100ml。28℃至32℃菌丝产量相对稳定，差异不显著。36℃培养菌丝产量急速下降，40℃菌丝停止生长。可见虎奶菇最佳的培养温度为28℃~32℃。表2 温度对菌丝产量的影响 Table 2 Effects of temperature on the mycelia yield 温度 菌丝产量 差异显著性 ℃ （mg/100ml） 0.05 0.01 40 0 a A 36 216+65.2 b B 20 453+40.4 c C 24 966+22.7 d D 32 1023+18.7 e DE 28 1067+57.3 e E 注:* 数据为5重复的平均值±标准差，小写字母不同表示差异显著（P﹤0.05）， 大写字母不同表示差异极显著（P﹤0.01），下文同。 2.2　起始pH对菌丝产量的影响 由于葡萄糖在高温过程中产酸，pH难以控制，本试验葡萄糖用甘露醇替代，培养液高压灭菌后用NaOH和HCl调成不同的pH。从表3结果看出，pH从３升至６，菌丝产量不断增加，pH６时菌丝产量达最高值，pH７之后菌丝产量逐渐下降。试验说明虎奶菇较适合在pH６中性偏酸的环境生长，该值与培养基自然pH６.5相近。 表3 　pH对菌丝产量的影响 Table 3 Effects of pH value on the mycelia yield pH 菌丝产量 差异显著性 （mg/100ml） 0.05 0.01 3 0 a A 4 622+22.4 b B 9 710+33.0 c C 5 732+18.1 c C 8 808+72.4 d D 7 910+63.7 e E 6 1048+41.8 f F