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载体构建 戎浩 2015.12CONTENTS目录 载体简介1 载体构建2 注意事项3 常见问题4目的基因的克隆与鉴定生理检测载体构建纯化大肠转化，质粒提取与鉴定移栽分子检测继代繁殖农杆菌的转化与活化筛选外植体制备浸 染共培养1.载体简介 1.1载体 载体（vector） ，能将外源DNA或基因片段携带入宿主细胞内的一个具有自我复制能力的DNA分子。1.2载体的分类质粒载体 质粒载体是一种相对分子质量较小、独立于染色体DNA之外的环状DNA(一般有1～200 kb左右)，有的一个细菌中有一个，有的一个细菌中有多个。质粒能通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移，可以独立复制，也可整合到细菌染色体DNA中，随着染色体DNA的复制而复制。1.2载体的分类噬菌体载体 利用噬菌体作载体，主要是将外来目的DNA替代或插入中段序列，使其随左右臂一起包装成噬菌体，去感染大肠杆菌，并随噬菌体的溶菌繁殖而繁殖。1.2载体的分类病毒载体 感染动物的病毒可改造用作动物细胞的载体。由于动物细胞的培养和操作较复杂、花费也较多，因而病毒载体构建时一般都把细菌质粒复制起始序列放置其中。使载体及其携带的外来序列能方便地在细菌中繁殖和克隆，然后再引入真核细胞。 现在人们还在不断寻找新的载体，如叶绿体或线粒体DNA也有可能成为载体。1.2载体的分类 克隆载体 中间载体 卸甲载体 植物