GZUIFR-H49-1菌株的产酶条件优化外文翻译预案.doc

一株新的嗜热毁丝真菌GZUIFR-H49-1的产角蛋白酶的条件优化 原文来源：J.D. Liang，Y.F. Han，J.W. Zhang et al .Optimal culture conditions for keratinase production by a novel thermophilic Myceliophthora thermophila strain GZUIFR-H49-1．Journal of Applied Microbiology 110, 871–880. 摘要 目标：为了研究培养基成分和培养条件对一株新的嗜热毁丝真菌GZUIFR-H49-1产角蛋白酶产量的影响。 方法和结果：有产角蛋白酶活性的嗜热菌株GZUIFR-H49-1通过形态学分析和ITS1-5.8S-ITS2rDNA 引物进行分子分析，确定其为一株嗜热毁丝真菌。通过单因素实验分析得出，在培养基的成分检测中，淀粉，尿素，硫代硫酸钠，氯化钙分别是最有效的碳源，氮源，硫源和金属离子。通过Plackett–Burman设计得出尿素和pH值是对酶活有罪显著性影响的两个因素。产酶条件通过Box–Behnken 设计进一步优化后，最终使角蛋白酶活性从最初的800U/L提高到5100U/L,得到了6.4倍的提升。 结论：本研究说明，最优化设计能够为培养基和培养条件的优化提供实用且非常有力的工具。嗜热毁丝真菌GZUIFR-H49-1是一株有作为角蛋白酶产业化菌株的能力。 本研究的意义和影响：本研究鉴定了一株有潜力用来得到角蛋白产物的嗜热菌株GZUIFR-H49-1。产角蛋白酶条件的最优化实验和方法为新型真菌的开发和应用提供了思路。 前言 干重中含有80-90%角蛋白的羽毛(Ghosh et al. 2008)是禽类生产工业中的一个主要废物。世界各地每年都会产生几百万吨的禽类羽毛(Szabo et al.2000; De Azeredo et al. 2006)。这种富含角蛋白的废物有很大的潜力作为动物饲料中蛋白质和氨基酸的来源。因为饲料蛋白来源的短缺，禽类羽毛废物已经被作为一种限制性蛋白质饲料来添加到饲料中去。然而，当前的工厂中使用物理和化学方法获得的羽毛粉对环境不友好，还会破坏氨基酸组成，动物难消化，营养品质与产品收益不稳定(Sangali and Brandelli 2000; Mabrouk 2008)。幸运的是，当把来自微生物的角蛋白酶和有角蛋白酶活性的微生物用来降解时，这些问题就可以迎刃而解，从而把废物变为产品(Riffel and Brandelli 2002; Cao et al. 2008)。 角蛋白是最丰富的不溶性结构纤维状蛋白质，也是头发、 指甲、 角、 毛、 皮肤和羽毛的主要成分。它不能通过酸、 碱等化学试剂和常见的蛋白水解酶，如胰蛋白酶、 胃蛋白酶和木瓜蛋白酶等轻松降解的，但很容易被蛋白酶所降解(Balaji et al. 2008; Mabrouk 2008)。角蛋白酶产物通常可以被角蛋白所诱导。在含有角质的底物，如羽毛中，有角蛋白酶活性的微生物可以被诱导生成大量角蛋白酶。更有趣的是，角蛋白酶可以广泛应用于农业、 工业、 生物医学、 生物能源和其他领域，例如，饲料、 家禽加工、 纺织品、 皮革、 美国进口、 化妆品和生物转化的处理等。这种酶可以用于羽毛转化为增值性产品，包括动物饲料、 肥料、 胶水、 薄膜和铝箔等。 可生产角蛋白酶的微生物已发现几种不同的微生物种类，，包括真菌、 细菌和放线菌。据报道在真菌中，一大批高产蛋白酶菌株存在于皮肤寄生性真菌和一些其他属中。然而，嗜热真菌的最低生长温度为20℃，最高为50℃，且鲜有报道其可以产生角蛋白酶。与嗜温菌相比，嗜热菌可能会有优势，因为其加速的反应过程和生物量与酶的积累减少了工业活动中污染的风险。从嗜热菌株中得到的酶也往往比那些从嗜温菌中得到的有更大的稳定性。 培养基及培养条件的优化对酶的生产起着至关重要的作用。角蛋白酶生产菌株受许多因素如温度，pH值和培养基中的碳，氮源的性质所影响。此外，这些因素在不同的物种中有不同的影响。所以，就必须优化可以使角蛋白酶超量生产的培养基成分和培养条件。通过y因素设计及响应面分析来优化也是一种获得最佳的工艺条件重要的途径。在本报告中，我们确定和描述一株分离到的新型的可快速生长的有角蛋白酶活性的嗜热真菌，然后通过优化各种培养基及培养条件的响应面方法来提高蛋白酶活性。 1 材料和实验方法 1.1样品收集和菌株分离 本实验中采用的嗜热毁丝真菌GZUIFR-H49-1是从中国四川省绵阳市的辣椒根际土壤中收集和分离到的。先将土样在三角瓶中加无菌水用力摇匀，再将土壤悬液涂布于由羽毛粉作为主要碳源和氮源的M培养基中，37℃中培养。挑取单菌落，