乌头碱体内代谢产物分析方法的研究.docVIP

乌头碱体内代谢产物分析方法的研究 项目完成人员：马辰 李慧义 李文东 刘爱茹 李农 项目完成单位：国家药物及代谢产物分析研究中心 摘 要 运用体内与体外代谢的方法对乌头碱的代谢转化作了研究，体外代谢运用大鼠肝微粒体体外温孵法，优化了温孵体系，建立了反相HPLC-DAD分离检测乌头碱及其体外代谢产物的分析方法；体内代谢运用对大鼠灌胃给药，收集0-8h、8-24h、24-48h三个时段的尿液，通过冷冻干燥有机溶剂提取的前处理方法， HPLC-DAD检测，建立了体内乌头碱的分析方法，确定了乌头碱一标志性的代谢产物，LC-MS分析初步确定其结构，同时对乌头碱水解产物及不稳定性产物作了研究，通过LC-MS分析，其水解产物为乌头碱8位酯键水解产物与乌头胺，不稳定性产物为8位的乙酰氧基结合一个氢掉一个乙酸基的产物。应用所建立的方法，对血、尿中乌头碱的分布进行了测定。 乌头碱液相色谱条件的建立与血尿中的分布 乌头碱、次乌头碱及其代谢产物的分子中均含有N原子，有较大极性，在分离中要考虑其结构特性。复方中的成分复杂，为了获得乌头碱与次乌头碱及其它组分的分离，曾选用乙腈-水-三乙胺系统，乙腈对被测组分的洗脱力强，出峰快，分离不好。甲醇-水-三乙胺系统，使化合物之间及与杂质有理想的分离效果。 对于碱性化合物来说，流动相的pH值对分离效果的影响很大。为此考察了0.05%，0.04%，0