反相高效液相色谱报告..pptVIP

多肽/反相之间相互作用的吸附/脱附模型 用RP-HPLC对固相合成的多肽进行纯化 固态多肽（SPPS）合成的多肽的纯化，需要除去由不完全偶联、去保护或外消旋化、侧链重排或在去保护和SPPS步骤中引入多种化学物质引起的非目的的肽。 一流动相的配制 ①分别配置1L的洗脱液A（弱流动相）和洗脱液B（强流动相） 洗脱液A为0.1%TFA水溶液 洗脱液B为含0.09%TFA的60%乙腈水溶液 ②在容量瓶中用Teflon包被的磁力转子搅拌将溶液混合 ③用0.2umPTFE过滤器先过滤洗脱液A，然后过滤洗脱液B ④洗脱液预脱气 ⑤用塞子塞进装有洗脱液的瓶子，避免有机溶剂挥发 二肽样品的制备 ①先用终体积的一半的洗脱液A溶解样品以达到所需浓度。如样品不容易溶解，加入少量洗脱液B（＜25%总体积） ②检验样品的纯度，如果含有不溶的固体颗粒，用0.2umPTFE过滤器过滤样品，或离心后取上清液。 三RP-HPLC纯化固相合成的多肽 (1)检测HPLC系统设备 a用空白对照进样（进洗脱液A）并用与多肽相同的洗脱梯度进行洗脱（100%A→100%B），如果出现“鬼峰”（假峰）就重复操作。 b用硫脲或硝酸钠来测量柱的死体积 (2)用RP-HPLC分析多肽粗制样 a在正式分析样品之前，要现在同样条件下做一组空白对照。如果出现峰，则重复该步骤。 b以分析型RPHP