《结缕草CBF基因的同源克隆及其转基因拟南芥的抗寒性验证》.docVIP

1 结缕草 CBF 基因的同源克隆及其转基因拟南芥的抗寒性验证? 冯勋伟1,2 才宏伟1,? 1中国农业大学农学与生物技术学院, 北京 100193; 2国家知识产权局专利局审查协作北京中心, 北京 100190 摘 要: 结缕草是优良的暖季型草坪草之一, 主要用于亚热带和热带地区的草坪种植。抗冷性是结缕草栽培范围的限制因 子。本研究以日本最北部原产的结缕草品系为材料, 根据其他植物的已知的抗寒基因 CBF 序列, 通过同源克隆的方法获得结 缕草中相对应的同源基因 ZjCBF ；根据和其他已报告的 CBF 序列的比对结果, 我们确定 ZjCBF 基因属于 CBF 转录因子家族 基因中 CBF1 型基因。利用半定量PCR和实时定量PCR分析该基因在寒冷条件下的表达情况, 发现 ZjCBF 基因受冷胁迫的 诱导, 在4处理6 h时表达量最高。在此基础上, 本研究构建了该基因的过表达载体, 并将其转化到拟南芥中, 通过低温冷 处理实验发现, 不论是否经过冷驯化, 转基因 ZjCBF 的植株由于 ZjCBF 的过量表达都要比野生型植株抗寒性强。 关键词: 结缕草；耐寒性；CBF转录因子；同源克隆；转基因拟南芥 Cloning of Zoysiagrass CBF Gene and Validation of Cold Tolerance in Transgeni