1-2基因工程的程序.ppt

若通过基因过程生产人的糖蛋白可以用大肠杆菌作为工程菌吗？ 不可以，糖蛋白上的糖链是在内质网和高尔基体上加工完成，而内质网和高尔基体存在真核细胞中，大肠杆菌是原核生物，细胞中不含这两种细胞器。 以酵母菌作为工程菌可以吗? 可以，酵母菌为真核生物（真菌类）。 四.目的基因的检测与鉴定 检测— 鉴定—— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 DNA-RNA分子杂交 抗原-抗体杂交 基因探针，是一段带有检测标记，且序列已知的，与目的基因互补的核酸序列。 　基因探针通过分子杂交与目的基因结合，产生杂交信号，能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。 1.检测 转基因生 物的DNA 探针 15N 15N 14N 14N （1）检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了 目的基因 基因探针： 放射性同位素等标记的DNA分子 方法—— DNA分子杂交技术 变性 变性 基因的结构（补充知识） 非编码区 非编码区 编码区 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 ①RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。 ②转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。 ③转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。 1、编码区：能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质的序列。 2、非编码区 ：调控遗传信息表达的核苷酸序列(启动子、 终止子），不编码蛋白质。 原核细胞的基因结构 真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 内含子 外显子 启动子 终止子 基因的结构（补充知识） 与RNA聚合酶结合位点 1、编码区 2、非编码区 ：调控遗传信息表达的核苷酸序列(启动子、 终止子），不编码蛋白质。 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 原核细胞 真核细胞 不同点 编码区是 _____的 编码区是间隔的、_____的 相同点 都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 思考 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？ 连续 不连续 编码区 非编码 2.目的基因的来源： 一、目的基因的获取: ①从自然界已有的物种分离 ②人工方法合成 3.获取目的基因的常用方法： ①从基因文库中获取目的基因 ②利用PCR技术扩增目的基因 ③人工合成目的基因 一、目的基因的获取: （一）从基因文库中获取目的基因 1.基因文库： 2.基因文库的分类： 按照外源DNA片段的来源： ●从特定组织提取的染色体基因组DNA---基因组文库（包含了一种生物所有的基因） ●mRNA反转录成的cDNA拷贝----cDNA文库（包含了一种生物的一部分基因，即部分基因文库） 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 1)基因组文库(Genomic library) 是指将某种生物体的全部基因组DNA用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度范围的DNA片段，再与合适的载体在体外重组后，导入受体菌的群体中储存，这个群体就称为该生物基因组文库。其目的是分离有用的目的基因和保存某种生物的全部基因。 一、目的基因的获取 （一）从基因文库中获取目的基因 ●基因文库 某生物体内全部DNA 许多DNA片段 受体菌群体 限制酶 与运载体连接 导入 基因组文库 直接分离基因 一、目的基因的获取 （一）从基因文库中获取目的基因 ●基因文库 cDNA(complementary DNA，互补DNA)： 是由生物的某一特定器官或特定发育时期细胞内的mRNA经体外反转录后形成的互补DNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做这种生物的cDNA文库 2)cDNA文库 (cDNA library) 某种生物某个时期的mRNA cDNA（互补DNA） 反转录 受体菌群体 与运载体连接 导入 cDNA文库 基因组文库与部分基因文库的关系 DUCK179制作 3.怎样构建基因文库? ①：直接分离法 供体细胞中的DNA 许多DNA片段 各自与运载体结合成重组DNA分子 限制酶 受体细胞 受体细胞产生特定性状 导入 外源DNA扩增 目的基因 分离 (鸟枪法) 一、目的基因的获取 （一）从基因文库中获取目的基因 多用于原核生物 反转录法 目的基因的mRNA 目