人教版高中生物选修12(阅读).pptVIP

* 第二节　基因工程的基本操作程序 ①获取目的基因 ②构建基因表达载体 ③将目的基因导入受体细胞 ④目的基因的检测与鉴定。 一、获取目的基因 １、方法： ２、几种基因文库的比较 ①从基因文库中获取目的基因 ②人工合成目的基因 ③利用PCR技术扩增目的基因 目的基因： 基因文库： 基因组文库： ｃDNA文库： 终止子 基因组文库： ｃDNA文库： 大、有启动子、有内含子、含某物种全部基因、部分可在物种间交流 小、无启动子、无内含子、含某物种部分基因、全部可在物种间交流 编码蛋白质的基因 受体菌群所含有的某种生物的基因群 受体菌群所含有的某种生物的全部基因 受体菌群所含有的某种生物的ｃDNA群 非编码区 非编码区 编码区 原核细胞基因结构 不转录为mRNA 转录为mRNA RNA聚合酶结合位点 非编码区 编码区 非编码区 RNA聚合酶结合位点 外显子 内含子 真核细胞基因结构 编码区能够编码氨基酸的序列 编码区不能够编码氨基酸的序列 内含子也转录为信使RNA ，成熟后被切除 注意： cDNA文库中无启动子、终止子和内含子的原因 成熟mRNA无基因中非编码区和内含子区的对应序列 ３、ＰＣＲ技术 体外合成DNA的技术 ①DNA热变性产生单链（90-95℃） ②引物与模板互补结合(55-60℃) ③Taq酶催化合成子链(70-75℃) ④重复循环①②③ 扩增倍数 ① ② ③ ④ 2n 条件 过程 模板(目的基因) 、dNTP、Taq酶、引物(RNA) 二、基因表达载体的构建（核心） １、目的 ２、构建基因表达载体的步骤 ① 使目的基因稳定遗传并表达 特定限制酶切割质粒，使其产生特定黏性末端 ② 用同种限制酶切取目的基因，产生相同黏性末端 （① ②步聚的酶是否必须相同） ③ 将具有相同黏性末端的目的基因片段和质粒混合，加入适量DNA连接酶，即可产生重组质粒 ４、基因表达载体的组成 外源DNA分子的有效片段 特定DNA片段，位于基因首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，负责转录起始。 位于基因尾端，由终止因子辅助终止转录过程。 通过其表达产物鉴别并筛选含目的基因的受体细胞 ①目的基因： ②启动子： ③终止子： ④标记基因： 三、将目的基因导入受体细胞 １、转化： ２、常用的转化方法 ①导入植物细胞 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 原核生物的优点： ②导入动物细胞 ③导入微生物细胞 思考：Ca2＋的作用？ 显微注射技术（最有效） Ca2＋处理细菌细胞； DNA、缓冲液与细胞混合 繁殖快、单细胞、遗传物质少 细菌的细胞壁主要成分肽聚糖，Ca2＋可增加细菌细胞壁的透性。 *