《袋料栽培灵芝灵芝最适pH的研究》.docx

袋料栽培灵芝灵芝最适pH的研究pH值是微生物生长的一个非常重要的参数，合适的pH值能使细胞能持续、快速地生长。pH值在生长过程中对酶的活力的影响极为显著，因为通常各种酶只在一定pH值范围内才表现它的活力，而且同一种酶在不同pH条件下所表现出来的活性不同。为了进一步的了解灵芝栽培中最适pH值的范围，本实验研究了不同pH值对灵芝菌丝生长速度、子实体形态、产量、成分的影响，为灵芝栽培的培养基配方提供科学依据。试验工作方案设计如下。1 材料与方法1.1试验地点温江食用菌栽培基地1.2供试材料1.2.1品种或菌株及其来源灵芝菌种ZL13来源于四川省农业科学院。1.2.2栽培原料及准备试验用栽培基质原料包括木屑、棉籽壳、麦麸、石膏、石灰。其有机原料新鲜、干燥、未霉变、未生虫，无机化学原料正品。1.3试验方法1.3.1栽培方式袋式熟料栽培。1.3.2母种制备PDA培养基：土豆200g洗净后去皮，切成块状，加入自来水，煮至水开后30min，4层纱布过滤，滤渣再煮2次，合并滤液；加入琼脂15g，葡萄糖20g、蛋白胨2g、硫酸镁0.5g、磷酸二氢钾1.5g、定容至1000mL，115℃高压灭菌20min，冷却至30℃以下后接种，25℃避光培养。1.3.3原种制备杂木屑41%、棉籽壳42%、麸皮15%、石膏1%和石灰1%，含水量60%左右，PH5-6，每瓶装湿料500g左右，121℃灭菌150min（或者常压蒸汽灭菌24h），冷却至后无菌条件下接入母种，25℃避光培养。1.3.4栽培种制备杂木屑15%、棉籽壳60%、玉米芯15%、麸皮8%、石膏1%和石灰1%，含水量60%左右，pH5-6，每瓶装湿料500g左右，121℃灭菌150min（或者常压蒸汽灭菌24h），冷却至后无菌条件下接入原种，25℃避光培养。1.3.5栽培袋制备（1）培养基配方处理木屑（%）棉籽壳（%）玉米芯（%）麸皮（%）石膏（%）石灰（%）115601581124（2）培养基配制玉米芯和棉籽壳加水预湿24 h，将木屑、麸皮、石灰和石膏混合均匀，掺入预湿的玉米芯和棉籽壳中拌匀。选用17 cm*33 cm*0.05 cm的聚丙烯袋，每袋装湿料约1500g，121℃高压灭菌2.5 h（或常压蒸汽灭菌24h），冷却至室温后于专用接种室内接入栽培种。每个处理30袋（考虑破袋或污染等因素制作40袋栽培菌袋，以便生物统计学分析）1.3.6栽培方法(1)菌丝阶段：25℃；空气相对湿度50%左右；光照0lx。(2)出芝阶段：27℃；空气相对湿度90%左右；原基分化时CO2浓度低于600ppm（400ppm左右），菌盖长到3cm以上时CO2浓度不超过1000ppm；光照1000-2000lx。2 观测项目或指标灵芝生长期观测记载各个处理的项目及指标见表1、2和3。灵芝袋料栽培最适pH试验数据记录表表1 不同生石灰添加量的培养基灭菌前后pH值的变化（灭菌时间：从 月 日 点 至 月 日 点）编号生石灰含量添加前pH添加后pH灭菌后pH11%24%表2发菌2期间各个处理观测记载的项目及指标项目组别编号接种时间（月/日）种块萌发时间1（月/日）定植3时间（月/日）定植期4（d）菌丝生长速度5（mm/d）菌丝满袋时间6（年/月/日）发菌期7（d）菌丝长势8污染9袋数（袋）杂菌种类101%生石灰1123452123453123454123454%生石灰112345212345312345512345备注专业术语规范（参照《GB/T12728-2006食用菌术语》并结合生产实际，规范实验中相关专业术语）1萌发：指接种物或接种块在培养基质中恢复生长。2发菌：又称“走菌”，指菌丝体在培养基物内生长、扩散的过程。3定植：又称“吃料”，指接种块菌丝重新长在新的培养基物上。4定植期：至菌种块接种与栽培基质上至菌丝定植的天数，以d表示。5菌丝生长速度：指菌落菌丝体在栽培基质中日均直线生长的快慢程度。菌丝生长速度（mm/d）=菌丝在菌袋中直线伸长长度（mm）/菌丝生长天数（d）6菌丝满袋：指菌丝体长满栽培料袋。7发菌期：又称“满袋期”，指菌种块总接种于栽培基质上至菌丝体长满栽培基质的天数，以d表示。8菌丝长势：将菌株间的菌丝互相比较，菌丝长势分为三级（以“+”多少表示长势的强弱程度：“+”表示菌丝长势一般，“++”表示菌丝长势较强，“+++”表示菌丝长势强）。9污染：指在培养过程中混有其他微生物。10杂菌种类：指食（药）用菌培养过程中引起污染的微生物种类。菌丝直线伸长长度测量方法采用划线法测量。当菌丝在料袋中生长刚过“袋肩”时，先用记号笔在菌袋表面中央纵向画一条直线，再在菌丝前端沿直线画垂直线，次垂直线作为测定菌丝直线生长的起始线，过30天后（10天划一次）再在菌丝前端划一垂直线，测量两垂直线之间的距离，即为30天内菌丝直