谷丙转氨酶活性的测定精品.pptVIP

谷丙转氨酶活性的测定 实验目的 1.掌握谷转氨酶活性测定的原理和方法 2.了解转氨酶在生物体内的重要作用 实验原理 1.转氨酶能催化α-氨基酸的α-氨基与α-酮酸的α-酮基进行相互转化，生成新的氨基酸和新的酮酸，这一过程称为转氨基作用。 2.动物体内含量最多的是谷草转氨酶GOT和谷丙转氨酶GPT。GPT在肝脏内含量丰富，血清内含量极少，但当肝脏受损时，酶从肝细胞释放，血清内GPT含量升高。GPT能催化的反应如右: 丙氨酸 + 酮戊二酸 → 谷氨酸 + 丙酮酸 3.丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应，生成丙酮酸二硝基苯腙，该物质在碱性溶液中显棕红色，利用分光光度计测定该棕红色物质的吸光度值，间接测定丙酮酸的含量，并制作标准曲线。 试剂与器材 分光光度计 水浴锅 血清 NaoH溶液 1.试剂 0.1mol∕L 磷酸盐溶液 GPT基质液 2,4-二硝基苯肼溶液 2μmol/ml的丙酮酸标准液 75%的乙醇 2.器材 烧杯 移液管 胶头滴管 容量瓶 玻璃棒 比色杯 电子天平 试管及试管架 洗耳球等 操作步骤 一.血清的提取 1.电子天平称量小鼠体重，用75%的乙醇按一定比例对小鼠进行灌胃。灌胃时要紧贴上颌，将针头轻轻旋入胃中，一边观察小鼠精神状态一边缓缓注入一定体积的乙醇。 2.24h后，摘除小鼠眼睛，于眼部取血至离心管。 3.3500r∕min