酶工程-05电泳解读.pptVIP

电泳技术 1 电泳：带电粒子在电场中向着与其本身电荷相反的电极移动的过程。 2 电泳技术优点：快速、准确、重现性好 3 电泳方法分类 按电场分：常压（500V，适用大分子）、高压（500V，适用小分子）支持体分：自由电泳、区带电泳 仪器装置分：水平式、垂直式、悬架式 4 电泳条件：水溶液（缓冲液）、支持物（区带电泳）、电场（电泳仪、电泳槽） 一 电泳的基本原理 电泳分离： 移动方向：带电性质决定 泳动度：带电颗粒在单位电场强度下的移动速度。 μ ＝v/E=(d/t)/(V/l)=(dl)/Vt 影响μ的因素： 1颗粒本身：带电、大小、形状 2 外界因素：电场强度E、pH、离子强度I、电渗、缓冲液粘度及温度等。 二 纸电泳 以滤纸为支持体的电泳技术 操作要点： 1 选择缓冲液 对显色剂和紫外光吸收等观察区带的方法无影响 A 分离蛋白质，pI≈ 5，选pH8.6的缓冲液（巴比妥缓冲液pH8.6、硼酸pH8.6、磷酸pH7.4) B 分离氨基酸：邻苯二甲酸氢钠、磷酸—醋酸，pH5.9 C 分离核苷酸巴比妥－醋酸pH2.5，柠檬酸pH2~3 D 分离糖类：HAC-NaAC, pH3~5 2 滤纸的选择与处理 层析用滤纸，纸宽2～3cm/样品组分，长短影响电场强度。 3 点样 点圆点（量少）、点条状（一般），点中间（未知样品）、点一边（已知样品）干法、湿法