应用生物化学5-蛋白质组学-2-DE幻灯片.pptVIP

蛋白质组学-双向电泳(Proteomics-2DE) 化学与生命科学学院 One Genome – Many Proteomes Central dogma From Genes to Proteins 蛋白质组(proteome)是澳大利亚学者Williams和Wilkins于1994年首先提出，源于蛋白质（protein）与基因组（genome）两个词的杂合,意指proteins expressed by a genome，即“一个细胞或一个组织基因组所表达的全部蛋白质”。 在人类基因组计划中大约有30,000个基因被鉴定出来。 一个基因=平均4个左右的剪接变异体，约120,000或更多的独立蛋白。 +翻译后修饰和蛋白相互作用，蛋白质组比基因组复杂10倍以上。 Proteomics 指应用各种技术手段来研究蛋白质组的一门新兴科学，其目的是从整体的角度分析细胞或组织内动态变化的蛋白质组成成份、表达水平与修饰状态，了解蛋白质之间的相互作用与联系，揭示蛋白质功能与细胞生命活动规律。 2. 双向电泳的实验原理 　双向电泳在第一向分离中蛋白质先按其等电点分开（isoelectric point pI值）。pI值就是使蛋白质不带净电荷，且在电场中不发生迁移的特定pH值。这项将蛋白质按其等电点分离的技术称为等电聚焦（IEF）。 2. 双向电泳的实验原理 　 双向电泳的第二向电泳是在第一向垂直方向上进行SDS分离。 差别分析示意图 Excision / digestion Mass spectrometry 肽指纹图谱搜库 3. 蛋白质组学与疾病研究 通过测定体液和组织的蛋白质组,我们可以寻找特异疾病的生物标记,即疾病特异性蛋白(disease specific proteins, DSPs)。 DSPs水平的变化对于疾病诊断、治疗和判断愈后具有重要意义,还可以成为研究药物的药理或毒理作用的靶点。 1997年召开了第一次国际“蛋白质组学”会议 1998年在美国旧金山召开了第二届国际蛋白质组学会议 1999年1月在英国伦敦举行了应用蛋白质组会议 我国也于1998年启动了蛋白质组学研究，在中科院上海生物化学研究所举办了两次全国性的蛋白质组学研讨会 2003成立了中国人类蛋白质组组织（CHHUPO），并分别于2003年9月、2004年8月以及2005年8月召开了中国蛋白质组学首届、第二届及第三届学术大会，2004年10月在中国北京召开了第三届国际蛋白质组学会议。 Central dogma 蛋白质分子在溶液中由于其末端氨基、末端羧基及侧链的游离基团而成为带电颗粒，并可在电场内移动，其移动方向取决于蛋白质分子所带静电荷。不同蛋白质分子根据其氨基酸组成及所在溶液的pH值，携带的静电荷不尽相同，致使它们在电场中的迁移率各异，从而达到分理的目的。 （two-dimensional electrophoresis，2-DE） 将基因体或是由所取得的检体利用蛋白质体技术将其展现出来,可以对此生物功能获得较全面性资讯.当人类得到某种感染性疾病时,利用被感染者的血液或病变细胞当作检体,以蛋白质体方法分析与控制组间之差异性蛋白,筛选感染性微生物之标的蛋白质,利用这些标的蛋白质探讨其感染及代谢途径或是制造出诊断性抗体,相信这将成为研究感染性疾病的新标准模式. 蛋白质组学可以用来分析体液中特殊的蛋白,来解说在疾病诊断上的影响,有助於对疾病成因的了解,病程的控制与研究判断预后的结果 . 患有脑膜炎或是头部外伤的患者,可以取其脊髓液,透过双向电泳技术来鉴定蛋白质型态 患有呼吸窘迫的病人,因其胸腔充满液体而压迫到气管,可经由胸腔穿刺吸出该液体後便可减轻患者的症状,再利用双向电泳技术分析体液的成分 患有快速痴呆症者,已在其脊髓液中,检验发现两种不正常的蛋白 (命名为 130 和 131),最近被确定为 Tau g chain,此为临床上 CJD 所特有的病征.  蛋白质体学的研究也可以帮助我们去寻找新的疾病指标,相信在不久的将来将有助於监测疾病的进程,更进一步有助於疾病的治疗  扩大性心肌病变(Dilated cardiomyopathy, DCM )是一种严重的心脏疾病,也是现代繁 忙的都市人经常易患的疾病,最后将导致心脏失去功能;病人通常都只能期待换心以维持生命. 运用蛋白质体的方法已经鉴定出心肌中150种蛋白质,比较后发现有25个蛋白质有明显的差异;经由这些已确认的蛋白质资料库与病人(或高危险群)的蛋白质做比对,或许可以在疾病产生初期达到早期预防的目的. 肺癌是最具肿瘤性 (oncological) 的