原始标本涂片检查对微生物检验全过程的导航作用.200566222728.docVIP

原始标本涂片检查对微生物检验全过程的导航作用 过祥豹（第四军医大学，西安 710032） 目前微生物学检验正向自动化发展。根据美国推行自动化中的教训，标本涂片手工操作仍不能缺少。原始标本未染色湿片位相显微镜观察和染色标本片检查，不仅对诊断提供快速有价值的信息，对微生物检验全过程能起到导向和领航作用。这是涂片对培养的“反向”作用，值得引起注意。本文对各种原始标本涂片方法、作用等作一简单叙述。 1 微生物检验中原始标本涂片检查不能缺少 新西兰奥塔哥大学在培养医学检验高级人才中特别强调，自动化仪器虽然值得应用，但检验人员对其结果仍要细心判断和核对，且不是适用于每种试验。在微生物检验中，手工制作的标本片在显微镜下详细观察仍很必要。 美国一些实验室在推行微生物检验自动化过程中走过弯路。由于忽略了对标本片中培养菌落的观察，常使自动化检验结果答非所问，甚至误导。后把有经验技师请回，作涂片和平板的判读（smear and plate reading ）,才校正了偏差。 临床微生物检验技术向来是以培养为核心，这是肯定和明确的。因通过培养能分离和鉴定致病菌作病原学诊断，取得菌种进行药敏试验，对病人作针对性治疗。培养也可验证涂片镜检所见，使之更有科学性。 2 原始标本涂片的检查方法 2.1 不染色标本湿片特别推荐位相显微镜检查 未染色湿片加盖玻片后还可在位相显微镜下用油镜检查。由于放大倍数大和光线处理得当（位相明视野中微生物可呈暗色），显现微生物更加清晰。位相集光器和位相镜头与普通集光器和油镜头可装同一架显微镜上，旋转相应集光器和镜头，即可自由可选择。有的显微镜附有上下升降的特别集光器，调节至适当位置，通过位相物镜就能观察未染色标本明视野中明对比和暗对比，以及暗视野各个连续图像。 血液可疑阳性培养物应用位相显微镜湿片检查，比较容易发现以下微生物：厌氧菌，布鲁菌，嗜血杆菌，其他革兰氏阳性小杆菌，弯曲菌，螺杆菌，疏螺旋体，钩端螺旋体及曲霉菌等（它们用革兰氏染色常漏检），还能观察微生物的动力。丹麦微生物实验室将血培养物的位相显微镜检查早已定为工作常规，在检查未离心小便湿片时，又将位相显微镜观察作为小便细菌数半定量测定，辅助诊断尿路感染。台湾蔡文城教授在脓、伤口及体液标本的检验中特别指出：“肺及脑化脓性检体在直接革兰氏涂片常看不到细菌，可用相位差显微镜观察湿涂片。” 2.2 原始标本染色涂片制备 一般手工制片的通病是涂抹太厚，染色后内容重叠无法观察，影响检出率。理想的涂片应是细胞舒展不拥挤，细菌在细胞内外分明，容易看清细菌和细胞形态特点。制作方法除涂抹法外，还有滚动棉签的滚片法，组织标本印片法，痰液标本的压片法，诊断菌群失调的粪便推片法等。涂片法和印片法特点是菌膜菲薄，脓细胞的胞膜不易破裂，能呈现细菌在细胞内的自然状态。痰液粘稠，不便用接种器钩取，宜用两根牙签选取少许脓痰，置两玻片之间，加压使标本展开，再移动玻片向相反方向分开，即成两片菲薄的痰标本片。有网膜形成的脑脊液可用倾倒法标本片厚度以涂片对光观察呈毛玻璃状为合格。 2.3革兰氏染色法及其功能 革兰氏染色法是由丹麦临床医师Han Christian Gram 于1884年首创，随着近年来深入工作，加深了对革兰氏染色片检查的认识，在原有的基础上又增加了新功能。即（1）鉴别细菌；（2）选择药敏纸片；（3）早期诊断；（4）判定合格标本；（5）确定主要病原菌；（6）病原菌半定量；（7）查腹泻菌群失调；（8）提示需补充检查项目；（9）解释培养结果；（10）有利于细菌鉴定。详情可见另文。 3原始标本涂片检查对微生物检验全过程的导航作用 原始标本涂片检查的多功能并非孤立存在，在检验起始阶段应用，它们与标本检验全过程密切相关，对检验路线起到“导向”和“导航”作用。举临床常见标本加以论证。 3.1 尿液标本检验 检验特点是以尿液的湿片直接镜检结果为依据，进而安排培养计数，细菌鉴定和直接药敏试验，大多数在24h出最后结果。 3.1.1 尿液位相显微镜直接镜检 将新鲜中段尿未离心的尿液管摇匀，在玻片上加尿液1滴（约10μl ），放盖玻片滴油，用位相显微镜检查（60x～1000x）。每份标本检查10个视野。每个600x～1000x视野中有一个细菌，相当于每毫升尿液中104～105个细菌（这种关系由镜检和培养计数对比而来）。尿路感染尿液大多含菌106～108/ml，至少在105以上，故每个油镜视野中发现10～1000个细菌，常可能有尿路感染，这时即可与临床联系进行初报。卫生部2001年颁发新《医院感染诊断标准》中也提到“新鲜尿液标本经离心，应用相差显微镜检查1×400），在30个视野中有半数视野见到细菌”者可协助诊断尿路感染。 3.1.2 尿液的培养计数 根据显微镜所见决定培养步骤。若每个油镜视野均未见细菌，取10μ