SLE患者外周血T、B淋巴细胞凋亡研究.docVIP

SLE患者外周血T、B淋巴细胞凋亡研究系统性红斑狼疮（SLE）是一种多发于青年女性的累及多脏器的自身免疫性炎症性结缔组织病。中国系统性红斑狼疮患者超过100万，为全球之最，根据流行病学研究表明，系统性红斑狼疮的患病率在我国约为7/100000，在女性患者中接近1/1000。目前发病机制尚未肯定。1 资料与方法1.1一般资料 选择2009年1月～2011年3月在本市各大医院收治的系统性红斑狼疮患者33例，全部为女性，平均年龄（34.58±5.87）岁，平均病程（4.38±1.34）年，以此作为SLE患者组。另外再选取健康女性31例作为正常对照组，均无内分泌和代谢性病史，年龄在（36.84±6.59）岁，两组年龄差别无统计学意义（P0.05）。1.2主要试剂 小鼠二步法和兔二步法检测试剂盒都采用北京中杉金桥生物技术有限公司生产的产品。小鼠抗NFκB一抗和兔抗Bcl-2选用Santa Cruz公司产品，AnniexⅤ/PI凋亡检测试剂盒购自深圳晶美生物工程公司。淋巴细胞分层液选用的是TBD公司产品，比重为1.077。1.3免疫学检测 用间接免疫荧光法检查，约90%以上患者抗核抗体为阳性，其滴度在1：64～1：80时方有诊断价值。荧光染色的核型一般分为均质型、斑点型、核仁型和周边型。其中周边型主要发生在SLE病例；约75%～95%患者血清总补体值下降，C3、C4亦下降，尤其是C3下降明显；循环免疫复合物（CIC）活动期上升；用免疫印迹法检查如狼疮带试验阳性，此法特异性高，灵敏度高。1.4方法 收集33例SLE患者和31例健康对照者外周静脉血10ml，密度梯度离心分离外周血淋巴细胞，再经两次微绒毛法分离T、B淋巴细胞。细胞凋亡的检测采用Anniex Ⅴ/PI凋亡检测试剂盒，经流式细胞仪测定细胞凋亡百分率，Bcl-2和NFκB的表达采用免疫细胞化学法检测。2 结果2.1 SLE 患者外周血T、B淋巴细胞凋亡状态 与正常对照组相比较，SLE患者T、B淋巴细胞凋亡率明显降低（P0.01），见表1。2.2 SLE患者外周血T、B淋巴细胞Bcl-2表达 免疫细胞化学检测发现Bcl-2阳性染色为细胞质中出现棕黄色或棕褐色颗粒。与正常对照组相比较，SLE患者外周血T、B淋巴细胞Bcl-2的表达均明显增高（P0.01），见表2。2.3 SLE患者外周血T、B淋巴细胞NFκB表达 见表3。3 讨论对于整个免疫系统的自身耐受能力而言，细胞凋亡机制是具有十分重要的作用。在参与对抗原的应答之后，系统性红斑狼疮患者的外周T、B细胞就会发生凋亡消除，而未成熟的淋巴细胞为了有效避免发生自身免疫病，也会自行凋亡 [1]。从近年来的国内外的研究成果表明，在自身反应性淋巴细胞增多症和自身抗原的形成过程中，SLE患者大多都会有凋亡调控和免疫细胞凋亡的现象，诸如凋亡基因表达异常、凋亡速度快、凋亡率高等，细胞凋亡异常往往会起到十分重要的作用 [2]。另外，据美国科学家的研究报告表明：SLE患者的多种血细胞[3]中往往都会存在着凋亡加速的情况。凋亡加速能够活化B细胞，增加核小体的释放量，加速导致体内细胞凋亡，但是在SLE动物模型中我们发现SLE的发生与凋亡障碍直接相关，如MRL/gld和MRL/lpr[3]小鼠中存在着单基因突变，分别是FasL和Fas，它们将在很大程度上会使得凋亡信号降低，从而导致发生SLE。我们在人类身上和临床上都发现有SLE的表现，凋亡的降低或增加都会明显增生淋巴组织。我们在实验中与与正常对照组进行对比，发现明显增加了SLE患者的外周血T、B淋巴细胞的NFκB和NFκB表达，而 明显降低了SLE患者淋巴细胞凋亡率。所以，系统性红斑狼疮患者外周血T、B细胞凋亡的变化会延长B细胞寿命，增加自身抗体，降低T淋巴细胞对B淋巴细胞的调控障碍，促进凋亡抑制基因Bcl-2的表达，增加凋亡紊乱，进而抑制了细胞对凋亡的敏感性以及淋巴细胞的凋亡，最终使得系统性红斑狼疮发生。参考文献：[1]Vilen BJ， Rutan JA. The regulation of autoreactive B cells during innate immune responses[J]. Immunol Res， 2008， 41（3）：295-309.[2]Mackay IR， Leskovsek NV， Rose NR. Cell damage and autoimmunity： a critical appraisal[J].J Autoimmun， 2008， 30（1）：5-11.[3]Oates JC， Gilkeson GS. Nitric oxide induces apoptosis in spleen lymphocytes from MRL/lpr Mice[J].J I