周期性张应力对人牙周膜成纤维细胞增殖与CTGF表达的影响及其介导通路研究.docxVIP

周期性张应力对人牙周膜成纤维细胞增殖与CTGF表达的影响及其介导通路研究摘要目的：本实验采用多通道细胞牵张应力加载系统对体外培养的人牙周膜成纤维细胞（human periodontal ligament fibroblasts，hPDLFs）施加不同时间的周期性张应力，观察周期性张应力对hPDLFs增殖及CTGF表达的影响；通过检测添加JNK、p38MAPK、PI3K信号通路特异性抑制剂后hPDLFs表达CTGF的变化，明确各通路是否在周期性张应力诱导hPDLFs表达CTGF过程中起作用。方法：采用多通道细胞牵张应力加载系统，以hPDLFs为对象构建细胞体外培养-力学刺激模型。观察细胞形态特征，绘制生长曲线，为细胞力学加载实验准备实验细胞。加力组分别给予周期性张应力刺激1h、6h、12h、24h，加载的幅度10%（每一个循环包括3s-stretch/3s-relaxation），频率0.1Hz（6cycles/分），并以未加力组为实验对照组。应用CCK-8法（Cell Counting Kit-8）检测hPDLFs增殖的情况；应用ELISA法检测培养细胞分泌到上清液中的CTGF蛋白；应用荧光定量RT-PCR技术检测细胞CTGF mRNA的表达；应用Western blot技术检测细胞CTGF蛋白的表达。应用JNK信号通路特异性抑制剂SP600125、p38MAPK信号通路特异性抑制