实验二++革兰氏染色及细菌特殊结构观幻灯片.pptVIP

实验二 细菌的染色 单染色法只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。 复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。 常用的有：革兰氏染色法、芽孢染色法、抗酸染色法等 2、革兰氏染色 细菌细胞壁的结构 G＋细胞壁的网状结构致密，交联度高，用乙醇处理后，发生脱水作用，肽聚糖层孔径缩小，透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。 G－肽聚糖层较薄，交联度低，含较多类脂质，故用乙醇处理后，类脂质被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，细胞被脱色，经沙黄复染呈红色。 革兰氏染色的步骤 1. 涂片 2. 初染：滴加草酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约15－20秒后，立即用流水冲洗。 5. 复染：滴加番红染色液，染3－5分钟，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果并绘图。 3 枯草杆菌芽孢的染色 4 细菌荚膜的染色 实验报告 1、细菌简单染色、革兰氏染色的原理、方法和步骤。 2 记录所观察到的染色结果，并绘图 2、思考题 * * 细菌的简单染色 细菌的革兰氏染色 芽孢染色 荚膜的染色 1、掌握细菌的简单染色法，初步认识细菌的形态特征 2、学习细菌的革兰氏染色原理和方法 3、了解细菌的特殊结构：芽孢和荚膜 5、学习训练无菌操作技术。 实验目的 ? 细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上颜色。利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。 ? 简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。 实验原理 1 细菌的简单染色 ? 常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。 实验原理 (continued) ? 常用碱性染料进行简单染色，因为在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色，经染色后的细菌与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。 1、菌种 枯草芽孢杆菌培养物1d 2、染色剂 石碳酸复红染液 实验材料 菌悬液 滴加无菌水 取菌苔 操作步骤 涂片 固定 干燥 染色水洗 干燥镜检 1、涂片 取两块载玻片，各滴一小滴（或用接种环沾取）生理盐水（或无菌水）于玻片中央，用接种环以无菌操作从枯草杆菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混合并涂成薄膜。 如用菌悬液或液体培养物，可用接种环挑取1-2环直接涂于载玻片上。 Notes: 1） 载玻片要洁净无油迹 2）滴生理盐水和取菌不宜过多 3）涂片要涂抹均匀，不宜过厚。 操作步骤（continued） 3、固定 固定的目的： 1）使细胞质凝固，以固定细胞形态； 2）并使菌体牢固地附着在载玻片上。 固定方法： 涂面朝上，通过火焰数次 注意：温度不宜过高，以玻片背面不烫手为宜， 否则会改变甚至破坏细胞形态 操作步骤（continued） 2、干燥 室温自然干燥 4、染色 ◇ 将玻片平放于桌面上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。 ◇ 石碳酸复红染色约1min。 操作步骤（continued） 5、水洗 倒去染液，用洗瓶（或自来水）轻轻冲洗，直至涂片上流下来的水无色为止。 Note: 水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下，水流不宜过急，以免涂片薄膜脱落。 7、镜检 一般使用油镜（100倍）观察细菌个体形态。 要观察染色结果并绘图。 操作步骤（continued） 6、干燥 自然干燥或用电吹风吹干，也可用吸水纸吸干。 Notes: 必须等涂片完全干后才可滴加香柏油 革兰氏染色的实验原理 结晶紫初染 碘液媒染 乙醇脱色 番红复染 涂片固定 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、自己接种的斜面培养物 Figure 1 - A Gram stain of Gram + Staphylococcus cells. Figure 2 - Gram stain of Gram – E. coli cells 枯草芽孢杆菌2（24h培养物） 1、制备菌液：加4-6滴蒸馏水于小试管中，用接种环从斜面挑取菌体3-5环于试管中充分混匀。（7人一组） 2、染色：加孔雀绿5滴于小试管中。 3、加热：沸水浴，15-20分钟。 4、涂片：用接种环从小试管中取一环菌涂于一干净载玻片上，制成涂片。 5、干燥、火焰固定 6、水洗：用水洗至流出的水中