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开题报告 2006年10月1日 学科专业 儿科心脏病专业 学生姓名 孙胜涛 导师姓名 阳冠明 攻读学位 硕士研究生 前言 阿霉素（ADR）属蒽醌类抗生素，是一种高效、广谱抗肿瘤药物，临床常用于治疗多种肿瘤，然而其对心脏有毒性损伤作用。为此，研究和阐明ADR对心肌的毒性损伤机制以及寻找减轻ADR对心肌毒性的药物具有重要的意义。 题目 β-胡萝卜素（β-car）对ADR致大鼠心肌氧化应激的影响 研究目的 探讨ADR半醌自由基清除剂—β-car拮抗ADR致心肌抗氧化酶活性降低的机制，为临床应用ADR半醌自由基清除剂防治ADR对心肌的毒性损伤提供理论依据。 立题依据 1、ADR进入心肌细胞内代谢形成ADR半醌自由基，这是ADR导致心肌细胞产生活性氧（O2-. 、H2O2、 .OH）增加的始动环节。ADR进入心肌内代谢形成ADR半醌自由基，其把电子传递给O2生成O2-.，同时伴有H2O2生成增加，O2-.与 H2O2通过 Haber-Weiss反应或Fenton反应产生.OH（1、2） 立题依据 2、Sazuka等人报道ADR导致心肌细胞的抗氧化酶（SOD、GSH-Px、CAT）活性降低，且与活性氧-脂质过氧化无关（3）。 3、SOD、GSH-Px是心肌的主要抗氧化酶，它们主要存在于心肌细胞，故心肌的SOD、GSH-Px活性变化可反映心肌细胞的SOD、GSH-Px活性变化。ADR导致的心肌的SOD、GSH-Px的活性降低与其抑制SOD、GSH-Px的mRNA表达水平有关（4）。 立题依据 4、已经证实ADR导致心肌细胞产生活性氧 （O2-. 、 H2O2 、.OH ）增加，导致心肌细胞的氧化酶活性降低，使心肌细胞的抗氧化与氧化失衡，由活性氧引发心肌细胞的生物膜系统脂质过氧化是ADR导致心肌毒性损伤的重要机制（5、6 ）。 5、因此，清除ADR在心肌细胞内形成的ADR半醌自由基以及拮抗ADR导致的心肌细胞抗氧化酶活性降低亦即保护心肌细胞的抗氧化酶是防治ADR对心肌毒性损伤的关键。业已证实β-car清除ADR半醌自由基，并可拮抗ADR导致心肌的SOD、GSH-Px活性降低（7）。 立题依据 6、β-car拮抗ADR导致心肌的SOD、GSH-Px活性降低的机制尚不清楚。本研究拟观察β-car是否通过拮抗ADR所致心肌的SOD、GSH-Px的mRNA表达降低而拮抗ADR导致心肌的SOD、GSH-Px活性降低，且与维生素E（抗氧化剂）作对比，初步探讨ADR半醌自由基清除剂对心肌抗氧化酶的保护机制。这方面的研究尚未见文献报道。 研究方案-研究对象 1、研究对象：SD大鼠，由广西医科大学动物实验中心提供，♂,体重220-300g，清洁级。 2、样本含量：采用完全随机设计，分为5组，为了防止失访等因素，适当增加5%的数量，每组8只大鼠。 研究方案-研究指标的选择 1、抗氧化酶的活性测定 2、心肌的脂质过氧化物（LPO）的产物丙二醛（MDA）含量的测定 3、抗氧化酶的mRNA表达水平的测定 4、心肌酶之一肌酸激酶同功酶（CK-MB）的测定 实验方法-药品及试剂 总RNA提取试剂盒及RT-PCR试剂盒为GIBCO公司产品，DNA Marker为宝生物工程（大连）有限公司（Takara）产品，PCR引物由上海生工生物工程有限公司合成，其他试剂均为分子生物学专用试剂。 实验方法-药品及试剂 盐酸阿霉素（上海华联制药有限公司产品） ；β-胡萝卜素（上海第六制药厂）；VitE（上海第九制约厂）；硫代巴比妥酸（TBA）：（德国Merck公司产品）；5,5′-二硫对二硝基苯甲酸（DTNB）、邻苯三酚：美国Sigma公司产品；CK-MB测定试剂盒：日本第一化学药品株式会社产品。 实验方法-仪器 PCR仪、电泳仪、离心机、分光光度计、自动生化分析仪等仪器均为广西医科大学实验中心仪器。 实验方法-动物分组及处理 50只大鼠随机分为5组，每组为10只。 正常对照组：腹腔注射（ip）同体积的生理盐水，每日1次，共3次。 ADR组：ADR20mg.kg-1（ip）（8），共1次。 ADR+β-car（Ⅰ）组：β-car10mg.kg-1 (ip)(7)，每日1次，共3次。ADR的剂量及给药方法同ADR组。 实验方法-动物分组及处理 ADR+β-car（Ⅱ）组：β-car为30mg.kg-1(ip)(7)，每日1次，共3次，ADR的剂量及给药方法同ADR组。 ADR+VitE组：VitE为300mg.kg-1(ip)(9)，每日1次，共3次，ADR的剂量及给药方法同ADR组。 所有动物均 于实验的第4d处死（9）。