离心技术-2012幻灯片.ppt

* 由于离心机的驱动一般都用电机为动力， * 离心力的数据，通常是指相对离心力的平均值，也就是指离心管中点的离心力。 * 沉降系数是沉降速度（m/s）除以离心加速度（即角速度，m/s2）　 真核生物核糖体的大小亚基为28S、18S和5.8S。 * 对于生物材料，绝大多数样品是以水为介质。沉降系数用S表示，是为了纪念Svedberg对离心技术的贡献。 K值表示沉降系数为s的颗粒，在转头的最大速度下离心时，颗粒从小半径沉降到大半径所需要的时间。 * 适用于细菌等微生物、细胞和细胞器、病毒和染色体DNA等生物材料， * 密度梯度本身具有很好的抗对流、抗扰动作用，可以减轻操作过程中的干扰。 起稳定样品和样品层的作用。 可以同时使混合样品中沉降系数相差在10%－20%s几个组分分开，得到的产品纯度较高。 * 把样品放在梯度介质的顶端，利用沉降速度的不同，还有大小、密度、形状，将混合物分开成一条状。 * 等密度是根据颗粒密度的差异进行分离的，因此选择相应密度的的介质和使用合适的密度范围是非常重要的。 * 淘洗离心和连续流离心用得较少。 * 蔗糖化学性质稳定，但具有高渗作用，对细胞膜和细胞器的分离纯化不利。使用甘油为梯度液有时比蔗糖更优越，因为甘油可以渗透所有的生物膜，对酶的生物活性有保护作用。 * 线性：蛋白质，酶，核糖体亚基和一些植物病毒。 不连续：整体细胞、动植物组织匀浆中的亚细胞等 指数：易上浮的脂蛋白 * 样品浓度过高，样品可能以生沉淀，分离的区带较宽，分辨率下降，甚至使样品失去分离能力。浓度太低，分离的区带难以鉴定。 * 不要污染样品，受污染的样品得到的区带不清晰，分离样品的纯度受影响；不要破坏梯度的稳定性，直接关系到样品的分离效果；在操作过程中不能使气泡进入梯度液中，气泡由于其比重小，有较大的浮力，在气泡上浮的过程中会把梯度破坏。 * 铝为两性金属, 在偏酸性或偏碱性的溶液中容易腐蚀；高温下会使其强度大大降低，因此如用热水洗或用热风吹时，温度不得超过60℃，更不能用高温灭菌处理。 * 三、离心机和转头的维护 1.离心机安全操作 不过速运转 平衡运转 准确组装转头 不使用带伤转头 不使用过期转头 2.离心机的维护 每次用毕，对于超速离心机，只需定期清洁 离心机内腔。 对于高速离心机，每次必须将内腔擦干，且 不能长期将转头置于转轴上，以免传感器受潮 失灵。 3.转头的维护 离心机转头，如果忽视其设置的精密程度和 严格的使用方法，就会大大影响它的奉命。 事实上，一个转头在承受一百万倍的大气压 下，一克就相当于一吨的重量，若转头的表 面有很细微的裂缝，对转头就会造成很大的 影响，此影响可能会超过转头原本设置所能 承受的范围。 　 （1）维护转头寿命的三个因素： 专门的设计和制造 使用中的注意事项和合理的操作 当损坏或因疲劳连续使用而产生 不安全时，转头必须停用 转头的设计与制造 　　一般的生产厂家，在制造转头时，会进行 转头/马达系统的震动测试。它们会在一个特殊 构造的房间里进行非破坏性和破坏性试验，来 检验转头的寿命。 引起离心机转头损坏的原因 金属疲劳 化学腐蚀 应力腐蚀 金属疲劳 转子在加速过程中，材料内部多次重复受到 拉伸或松驰的交变引力的作用，引起材料结构 细微变化，经过一定次数的交变引力循环，这 些细微变化导致极细微的裂纹。 化学腐蚀 由于所用的离心管不能承受介质的性质，或者 离心管存放太久，老化后受不了强离心力的缘故， 会造成离心管的破裂，样品渗漏到转头内。 若没按规定程序操作，造成转头不密封，当抽真 空时，转头内腔产生负压，也会样品渗漏，对转 头产生化学腐蚀而严重影响转头的寿命。 应力腐蚀 应力腐蚀是金属疲劳和化学腐蚀两者同时作用 产生的结果。当转头某部分因受化学腐蚀或破 损后，该部分所承受的引力增大了，此种情况 下，转头便会很容易毁坏。 （2）转头操作的注意事项 避免CsCl结晶　 CsCl温度过低产生结晶，沉降就会胀破离心管， 从而损坏转头。 转头需加盖 由于疏忽大意，勿将转头盖盖紧，或忘记加盖， 当转头运行时，离心腔内会产生空气旋涡使转 头浮起，转头离开转轴而发生意外。因此在仪 器启动时，应再检查转头盖是否已盖紧。 注意溶液密度对转头速度的限额 溶液密度大小对转头强度受力有很大关系，在进行密度梯度或等密度离心时，配置的介质密度必须低于说明书中标记的转头所能承受的最大密度。若高于该密度，可用下列公式计算最大速度： 当采用塑料管戴硬铝帽、样品比重大于1.2，新的 最大速度＝转子最大转速＊(1.2/新的密度)1/2 当采用不锈钢管戴硬铝帽，样品比重小于1.2，最大允许转速必须减少设定速度的15%，即最大允