细胞生物学实验幻灯片.ppt

细胞生物学实验 实验一 临时制片法 3 实验二 细胞膜的通透性观察 3 实验三 叶绿体的分离与观察 3 实验四 线粒体的超活染色与观察 3 实验五 植物组织培养技术 6 实验六 孚尔根染色 3 实验七 果蝇系列实验 3 实验一、细胞多样性观察------临时制片法 【目的要求】 1、熟练掌握三种临时制片方法。 2、掌握油镜的使用方法 3、注意观察细胞核和细胞质及质膜、细胞壁 的形态(洋葱)。 【实验材料】 1、洋葱内皮细胞 2、口腔上皮细胞 3、人血细胞 4、碘液：I＋KI＋5%乙醇配制而成。 5、0.85%灭菌的生理盐水 6、普通显微镜、擦镜纸、载玻片、盖玻片、压舌板(消毒)、滴管及滴帽、香柏油、二甲苯、消毒的注射针头、刀片、小镊子、棉花球。 A Typical Animal Cell A Typical Plant Cell 普通光学显微镜 显微镜的分辨率与放大倍数 3. 分辨力：指分辨物体最小间隔的能力。 D = 0.61λ/ N．A = 0.61λ/ｎsinα/2 ． 其中λ为入射光线波长；N．A．为镜口率 ＝ｎsinα/2，n=介质折射率；α=镜口角（样品对物镜镜口的张角） 。 思考：如何提高显微镜的分辨能力？ 表一、几种介质的折射率 显微镜的几个光学特点 制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.65~1.78，所用介质的折射率越接近玻璃的越好。 sin α /2的最大值必然小于1；介质为空气，镜口率一般为0.05~0.95；油镜头用香柏油为介质，镜口率可接近1.5。 普通光线的波长为400~700nm，分辨力数值不会小于0.2μm，人眼的分辨力为0.2mm。 【操作方法】 1、取洋葱块茎，用刀片切下0.5 cm大小的小块时，小心用镊子夹住内皮，轻轻撕下，置于载玻片上，然后加2滴碘液，5～10min后，盖上盖玻片，同时用吸水纸拭去过多的碘液，随后置于显微镜下观察。 2、滴2滴碘液于载玻片上，然后将压舌板于口腔两侧（任一）轻轻刮取口腔上皮细胞，于碘液上适当涂抺，最后盖上盖玻片。 人血细胞涂片 3、一般从人的耳垂或指尖取血。先将采血的耳垂或指尖用碘液和75%酒精消毒，用经过灭菌的刺血针扎破耳垂或指尖皮肤，让血液流出，除去第一滴后采样。在灭菌载玻片右面1／3处滴血一滴。取另一张载玻片做为推片，让推片的一端与血滴接触，并与血滴玻片成350～400夹角。待血液沿着两块载玻片接触线向两边扩散后，将推片保持夹角，向血玻片左侧均速推进，血液随推片而行，在血玻片上形成一层血膜，即为血涂片。在血滴前推时，根据所滴血量多少，适时停推，盖上盖玻片。 4、显微镜观察方法 标本置于载物台上-----先于低倍镜（10×）观察-------高倍镜（40×）------上抬1cm --------加香柏油到标本上------调节镜头（100×），并使之埋入油中 --------适量调节粗、微调焦螺旋至看清材料--------镜下观察，并绘图； 实验结束，上升镜筒-------滴加二甲苯----用擦镜纸擦拭镜头--------将显微镜恢复原位，放入镜箱 注意事项与作业 【注意事项】 1、做血涂片时，应该注意：①推片的边缘要平滑。②推血膜时，用力要均匀，保持角度，中途不能停止。若停止再推，血膜产生波纹，薄厚不均。⑧推血膜时，如血滴大、角度大，速度慢，易出现较厚的血膜，对观察不利。 2、做刮取口腔上皮细胞前，应超前漱口，以防残留的食物渣影响镜下观察。 3、油镜使用完毕后，应及时用蘸有二甲苯的擦镜纸擦拭干净，以免油镜受到污染。 【作业】 1、绘图表示观察到的几种细胞形态（请标明放大倍数），并注明属何种制片法？ 实验二、细胞膜的通透性观察 【目的要求】 1、? 了解细胞膜对物质通透性的一般规律。 2、? 了解溶血现象及其发生机制。 Typical plasma Membrane Erythrocyte Membrane Skeleton 电镜下的红细胞 实验原理 细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。它是一种半透膜，可选择性控制物质进出细胞。水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，这种现象就是渗透。 将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗