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【试剂与器材】 1.总胆固醇测定试剂盒 2.酶标板、板条、微量进样器、微量移液器 3.生化培养箱、酶标仪 4. 血清 结果与计算 血清总胆固醇= * * 实验五 血清总胆固醇测定 浙江中医药大学 生命科学学院 生物化学教研室 【实验目的】 学习血清总胆固醇测定的实验原理。 掌握总胆固醇的测定方法和操作技术。 【实验原理】 血清脂类包括甘油三酯、胆固醇、胆固醇酯、磷脂、糖脂、游离脂肪酸。它们在血液中以脂蛋白（脂和载脂蛋白的复合体）的形式存在。用超速离心技术可把血浆脂蛋白分成四大族：CM、VLDL、LDL、HDL，用电泳技术可把血浆脂蛋白分成α-脂蛋白、前β-脂蛋白、β-脂蛋白、CM。 血清中总胆固醇（TC）包括游离胆固醇FC和胆固醇酯（CE）两部分。胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸（FFA），胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成Δ4-胆甾烯酮和过氧化氢，H2O2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC含量成正比。 【操作步骤】 配制工作试剂： R1取4.5ml，R2取0.5ml，置于10ml玻璃试管中 取酶标板1块，板条1条，按下表操作： 3.置于37℃生化培养箱10min，492nm波长处在酶标仪上读取各管的吸光度A。 测定管吸光度平均值 标准管吸光度平均值 × 标准物浓度 【参考值 】： 胆固醇: 血清参考值：3～5．20mmo1/L； 危险阈值：5．20～6．20mmol/L； 高胆固醇血症：＞6．20mmo1/L。
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