色谱法_01案例.ppt

②凝胶色谱法的固定相 软质凝胶、半硬质凝胶和硬质凝胶三种。 ③凝胶色谱法的应用特点 ★保留时间是分子尺寸的函数，适宜于分离相对分子质量大的化合物，相对分子质量在400～8×105的任何类型的化合物 ★保留时间短，色谱峰窄，容易检测 ★固定相与溶质分子间的作用力极弱，趁于零，柱的寿命长 ★不能分辨分子大小相近的化合物，分子量相差需在10%以上时才能得到分离 （三）高效液相色谱分离的选择 1.高效液相色谱法的运用范围 ★气相色谱法适用于分析相对分子质量较小，容易挥发成气体的物质。 ★气相色谱法控制温度可达300℃，热稳定性差的物质在此温度下将发生分解，但高沸点物质在此温度下也不能完全气化 ★高沸点、热稳定性差的有机化合物、以及相对分子质量大(大于400)的有机物(约占有机物总数的70%~80%)，均不宜应用气相色谱法进行分析，但可以应用高效液相色谱法进行分析。 ★高效液相色谱法在常温下进行分离与分析，不会导致被测物质的热分解，其流动相是液体，所以只要试样能制备成溶液，原则上都可以用高效液相色谱法分离与分析，如离子型化合物、不稳定天然产物以及氨基酸、蛋白质等高分子化合物均可用高效液相色谱法获得较好的分离效果。 2.高效液相色谱分离方法的选择 ①选择的基本依据 相对分子质量的大小： ★对于相对分子质量在200以下、易挥发、热稳定性好的化合物，可采用气相色谱法； ★★相对分子质量在200～2000的化合物，可用液-固色谱法、液-液色谱法、离子交换色谱法 ★★★相对分子质量大于2000的试样，适宜用凝胶色谱法进行分离 试样的溶解性 ★能迅速溶于水的样品，可采用反相液-液色谱法； ★★若试样全部或大部分能溶于HCl或NaOH溶液，表示试样属于离子型化合物，可采用离子交换色谱法来分离； ★★★溶于非水溶性溶剂(如己烷、异辛烷、苯、甲苯等烃类)的试样，可选用液-固吸附色谱法3溶于二氯甲烷或三氮申烷的试祥，选用常规的液-液色谱(正相色谱)法和吸附色谱法； ★★★★溶于甲醇等溶剂的试样，则可以用反相液-液色谱法进行分离与分析。 ①各类物质常用的分离方法 第一章 概论 色谱法简介 1906年正式命名色谱法Chromatography) Tswett应用吸附原理分离植物色素的新方法碳酸钙作固定相,把植物根茎叶的石油醚提取液从柱顶端倒入，然后用纯净的石油醚冲洗，结果出现不同颜色的谱带，Tswett把这种分离方法命名为“色谱”。 动画 第一节 色谱发展概况 第二节 GC与HPLC的比较 色谱的定义：利用不同物质在不同相（流动相，固定 相）中的不同分配系数进行分离的方法叫色谱法. 按两相状态分： 气相色谱 GC 液相色谱 LC 流动相 气体 液体 固定相 固体 液体 固体 液体 色谱 名称 气固GSC 气固吸附色谱 气液GLC 气液分配色谱 液固LSC 液固吸附色谱 液液色LLC 液液分配色谱 第三节 色谱色谱文献 发表GC文献的主要期刊 Journal of Chromatography .A 色谱 Journal of Chromatography .B 分析测试通报 The Journal of Microcolumn Separation 分析科学学报 Chromatographia 分析仪器 Journal of Chromatography Science Journal of High Resolution Chromatography LC·GC Analyst ★内标法 当只需测定试样中某几个组分，或试样中所有组分不可能全部出峰时，可采用内标法。 内标法是将一定质量的纯物质(非被测组分的纯物质)作为内标物，加入到准确称取的试样中，根据被测物质和内标物的质量及其在色谱图上相应峰面积之比，求出被测组分的质量分数。 设样品的质量为m，则待测组分i的质量分数为 选择内标物应遵循的原则： 试样中不存在的纯物质，否则会使色谱峰重叠而无法准确测定试样的色谱峰面积； 内标物的物理及物理化学性质应与被测物相近，当操作条件发生变化时，内标物与被测物均受到相应的影响两者相对校正因子基本不变； 色谱峰位于被测物色谱峰的附近，且能与被测物色谱峰完全分离； 内标物的浓度应与被测物的浓度相近。 例4.2.9 取二甲苯生产母液1500mg，母液中合有乙苯、对二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯及溶剂和少量苯甲酸，其中苯甲酸不能出峰。以150mg壬烷作内标物，测得有关数据如下： 物质 壬烷 乙苯