色谱分离技术案例.ppt

液相色谱仪（2） 液相色谱仪（3） 液相色谱仪（4） 流程及主要部件 （process and main assembly of HPLC） 梯度洗脱的实质是通过不断地变化流动相的强度，来调整混合样品中各组分的k值，使所有谱带都以最佳平均k值通过色谱柱。它在液相色谱中所起的作用相当于气相色谱中的程序升温，所不同的是，在梯度洗脱中溶质k值的变化是通过溶质的极性、pH值和离子强度来实现的，而不是借改变温度（温度程序）来达到。 三、固定相 1.固定相的特性 ① 较细的颗粒。一般为5～10μm。 ② 粒度均匀一致。 ③ 机械强度好，具有良好的耐高压刚性。 ④ 如果为多孔性颗粒，则孔径分布也要均匀。 ⑤ 化学和热稳定性好，耐酸碱，不容易产生不可逆吸附。 三、固定相 HPLC固定相骨架颗粒材料可分为无机和有机两类，无机类中应用最多的是硅胶，其他如多孔玻璃、羟基磷灰石、石墨炭黑等。 有机类主要为有机高分子合成材料，最为常见的是交联聚苯乙烯，其他常用的还有高交联琼脂糖、交联聚乙烯醇、交联聚乙烯吡啶和交联聚乙醇等。 2.固定相的分类 1）液-固吸附分离固定相 种类：硅胶、氧化铝和多孔聚合物； 结构类型：全多孔高效吸附剂、全多孔低效吸附剂和表面多孔吸附剂。 (1) 硅胶 分为薄壳玻璃珠、无定形全多孔硅胶及堆积硅珠等类型。 (2) 氧化铝 分为球形和无定形两种，粒度5～10 μm。对不饱和的碳氢化合物和含卤素化合物的分离效果较好。在硅胶上吸附太强的化合物可试用氧化铝。 (3) 多孔聚合物 以聚苯乙烯胶体为代表，在pH1～14中稳定。特点是选择性好、峰形好，但硬度不高。 (薄壳型微珠担体)30～40μm的玻璃微球，表面附着一层厚度为1 ～ 2μm的多孔硅胶。表面积小，柱容量底。 2) 液-液分配色谱固定相 (1) 正、反相色谱 流动相极性小于固定相的分配色谱法称为正相色谱法。以含水的硅胶为固定相，烷烃为流动相的色谱法是正相液-液分配色谱的代表。正相色谱法主要靠组分的极性差别分离，适用于含有不同官能团物质的分离。 流动相极性大于固定相极性的分配色谱法称为反相色谱法。在进行反相洗脱时，样品中极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱，主要分离对象是极性小的物质。 （2）化学键合固定相 化学键合固定相是应用最广的色谱法。将固定液的官能团键合在载体上形成的固定相称为化学键合相，其特点是不流失，一般认为有分配与吸附两种功能。 a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广 c. 硅碳键型： ≡Si—C d. 硅氮键型： ≡Si—N （2）化学键合固定相 ≡Si-O-Si-C键型键合相，按极性分为非极性、极性和中性三种类型。中等极性键合相较少使用。 A. 非极性键合相 非极性键合相又称反相键合相，其表面基团为非极性烃基，如十八烷基、辛烷基、乙基、甲基和苯基键合相。代表产品是十八烷基硅烷-硅胶，是最常用的非极性键合相。键合相优点是使用过程中不流失、热稳定性好、适于剃度洗脱等，其流动相常用甲醇-水或乙腈-水，主要分离对象是非极性或弱极性化合物。 （2）化学键合固定相 B. 极性键合相 极性键合相指键合有机分子中含某些极性基团，与空白硅胶相比，其极性键合相表面能量分布均匀，是一种改性的硅胶，常用的极性键合相有氨基、氰基等。氨基键合相是分离糖类最常用的固定相，常用乙腈-水为流动相。 3) 离子交换色谱分离固定相 结构类别： （1）薄壳型离子交换树脂 薄壳玻璃珠为担体，表面 涂约1%的离子交换树脂； （2）离子交换键合固定相 薄壳键合型；微粒硅胶键 合型（键合离子交换基团） 树脂类别： （1） 阳离子交换树脂（强酸 性、弱酸性） （2） 阴离子交换树脂（强碱 性、弱碱性） 4) 空间排阻分离固定相 （1）软质凝胶 葡聚糖凝胶、琼脂凝胶等。多孔网状结构； 水为流动相。适用于常压排阻分离。 （2）半硬质凝胶 苯乙烯-二乙烯基苯交联共聚物，有机凝胶； 非极性有机溶剂为流动相，不能用丙酮、乙醇等 极性溶剂。 （3）硬质凝胶 多孔硅胶、多孔玻珠等；化学稳定性、热稳定性好、机