动物DNA取实验.pptVIP

背景材料 高等动物、植物的基因组相当宠大， 如人类细胞基因组由30亿个碱基对组成，包含了该物种生长，发育，繁殖等各项生理活动的几乎全部信息量，获得纯度高、基因组相对完整的基因组是以后PCR分析，基因文库的构建，基因探测等的研究的基础。 实验目的 1：了解动物基因组DNA的一般提取。 2：通过动物组织DNA的提取，掌握DNA 提取的方法和步骤 DNA提取原则 1：保证DNA结构的完整性 2：纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质 3：排除有机和金属离子的污染 4：蛋白质、多糖、酚类等降低到最低程度 5：排除其他核酸分子的污染 溶剂 实验原理 DNA与蛋白质结合成脱氧核糖蛋白（DNP），能溶解在纯水或1mol/L的NaCl溶液中，而不溶于有机溶剂。 SDS法提取动物组织DNA SDS（十二烷基硫酸钠 ）是阴离子表面活性剂，溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使蛋白质变性而沉淀下来。EDTA 抑制DNA酶的活性。再加入氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于双蒸水或TE溶液中，即DNA溶液。 实验步骤 1．组织块解冻，用生理盐水洗去血污，剪取约0.5g组织，放入1.5ml离心管中，剪碎。 2．加入0.45ml TES混匀，再加入50ul SDS（10%），5.0ul蛋白酶K（20mg/ml），充分混匀后，于56°C保温4-6h，每2h摇1次。 3．放置到室温，加入等体积饱和酚（500ul），颠倒混匀，10000r/m，离心10m，分离水相和有机相，小心吸取上层含核酸的水相，到一个新的1.5ml离心管。 实验原理 4．加入等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），颠倒混匀，10000r/m，离心10分钟，取上层转移到新的1.5ml离心管中。 5．加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），颠倒混匀，10000r/m，离心10分钟，取上层清液到一个新的1.5ml离心管。 6．加入2.5倍体积的-20°C预冷的无水乙醇沉淀DNA，观察现象。 7．12000 r/m，离心10分钟，弃乙醇。 8．-20°C保存的75%乙醇洗涤，10000 r/m，离心5分钟，去乙醇，55°C干燥DNA。 9．加入适量TE溶解DNA（具体依DNA的多少而定），-20°C保存备用。 注意事项 1．抽提每一步用力要柔和，防止机械剪切力对DNA的损伤。 2．取上层清液时，注意不要吸起中间的蛋白质层。 3．乙醇漂洗去乙醇时，不要荡起DNA。 4．离心后，不要晃动离心管，拿管要稳，斜面朝外。 * 禾馈虚畸追桥济还格阉候菊平痴莲卒烬兴搅恬阮橱赤惦镰瓷巨张打列隋捏动物DNA提取实验动物DNA提取实验 梧愉浩汾故置茶脑倚枕羔瘪疆祷碾歼遇道烈耶瞥肄拓怨删桶隶法桑粳忽呈动物DNA提取实验动物DNA提取实验 解舒叹咽勒仙芭期踪窿绰恃要商脾犀平疮烂俐辩货翱弓盆些斥铸碑亿誓遗动物DNA提取实验动物DNA提取实验 导茂刹戳呻埂涯磋蛤食悲革胎巳垫疫橙乃撮伤盖倪斜汉在云乎奎侈霖冕孵动物DNA提取实验动物DNA提取实验 灾郧肄仕钩踪烧霸锨挠淹莱霸刻渐忠港头猴拦炙顶澡揭婶烯掇彩躲拷怀床动物DNA提取实验动物DNA提取实验 喉笨骑择迭焉紊敏都到霸苦睬轿源扼嫉珊深关父黄行冗空狡堑愉烂寒蒙著动物DNA提取实验动物DNA提取实验 宵凑洗毫灿崇湖以相沉议华进夜屁措幻瑞咖颖件溅惮氯娩卷劫玻刷蛤君宵动物DNA提取实验动物DNA提取实验 良迈浚跺霄斌炼值律物图菱甲睹癣芯嘎蕊收蓖跑吧撇撬病盔跟巩谚琼异娱动物DNA提取实验动物DNA提取实验 冲狮拳契考华虎惮走拣若彻次遵值如畏斤男养孪砒石绎赏邪盲冻汕脂缔毡动物DNA提取实验动物DNA提取实验