专题3植物的组织培养技术案例.ppt

二、实验操作 四、实验操作 （一）材料选取 2、通过镜检来确定是否处于适宜的发育期。 方法一：醋酸洋红法(将染色体染成红色) 方法二：焙花青-铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色)。 1、从花药看：月季的初花期 从花粉看：单核期 从花蕾看：完全未开放的 花药（载玻片上）→1%的醋酸洋红1滴→用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成红色） 花药（在卡诺氏固定液中处理20min）→取出，置于载玻片上→焙花青－铬矾溶液染色→盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色） （二）材料的消毒 5、无菌水冲洗3～5次 花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态 1、花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒 2、无菌水清洗 3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2～4分钟 （质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液） （三）接种和培养 1 灭菌后花蕾，要在无菌条件下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。 3 通常每瓶接种花药7-10个，温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 2 在剥离花药时，要尽量不损伤花药（否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。 一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。 4 进一步鉴定和筛选：常常会出现染色体倍性的变化（主要原因是花粉管核和生殖核融合造成的） 5、一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移栽到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。 6、对培养出来的幼苗进一步的鉴定和筛选。 （三）接种和培养 三、结果分析与评价 1、能够通过镜检找到处于适宜的发育期的花粉。用醋酸洋红法或焙花青－铬矾法检测单核靠边期的花粉粒。 2、花药出现污染的原因： （1）消毒不彻底； （2）接种室污染； （3）人为因素的交叉污染等。 * * 第 * 页 * 第 * 页 * 第 * 页 * 第 * 页 * 第 * 页 * 第 * 页 * 第 * 页 * 第 * 页 * 第 * 页 * 第 * 页 * 第 * 页 * 第 * 页 * 2016届第一轮复习之—— 选修1《生物技术实践》 课题1 菊花的组织培养 一）植物组织培养概念：指植物的离体部分（包括任何器官、组织、细胞或原生质体），在人工控制的培养基及环境条件（温度及光照）下，得以生长和分化成完整植株的一种无菌培养技术。 一、植物组织培养的过程 二）植物组织培养原理——植物细胞的全能性 全能性的概念：细胞的全能性是指已分化的细胞具有发育成完整个体的潜能。 全能性的原因：是生物体的每一个细胞都含有该物种所特有的全套遗传物质 全能性的大小 (1)物种不同：植物细胞>动物细胞。 (2)分化程度不同：受精卵>生殖细胞>体细胞（肝脏、肌肉等）。 (3)分裂能力大小：裂能力强的细胞>分裂能力弱的细胞，如分生区细胞>成熟区细胞。 三）植物组织培养的流程图： 四）相关概念： 二、影响植物组织培养的因素 一）植物材料的选择 不同植物的组织培养难度不同 同一种植物的不同组织培养难度不同 烟草和胡萝卜的组织培养较为容易；枸杞愈伤组织的芽诱导比较难；同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果。菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝 二）营养、环境条件 培养基的配制(MS培养基) a、大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S b、微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co c、有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 d、植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等 MS培养基各种营养物质的作用；微生物培养基与MS培养基的配方的不同 微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持培养基的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。 微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类 MS固体培养基成分及比例 三）植物激素 生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素，其作用及特点为： 二、影响植物组织培养的因素 在生长素存在的情况下，细