专题21 微生物的实验室培养案例.ppt

专题2 微生物的培养与应用 微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称。 病毒 细菌、蓝藻、支原体、放线菌 酵母菌、霉菌 单细胞藻类、 草履虫、变形虫等 无细胞结构 原核生物 真菌 原生生物 真核生物 课题1 微生物的实验室培养 1.提供合适营养和环境条件 2.防止杂菌污染 （一）培养基： 1、定义、分类及用途 人们按着微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 （1）按物理状态：液体培养基、固体培养基 和半固体培养基。 （2）按功能：选择培养基和鉴别培养基。 （3）按化学成分：天然培养基和合成培养基。 提供营养和条件 定义： 分类： 鉴别培养基 功能 合成培养基 天然培养基 化学成分 物理性质 用途 特点 培养基种类 划分标准 培养基的种类 不加凝固剂 加凝固剂，如琼脂 工业生产 观察微生物的运动、分类鉴定 微生物分离、鉴定、计数、保藏菌种 含化学成分不明确的天然物质 工业生产 培养基成分明确 分类、鉴定 在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长 选择、分离出特定微生物 在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物 鉴别不同种类微生物 选择培养基 液体培养基 半固体培养基 固体培养基 液体培养基： 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 半固体培养基： (是否运动) 无动力 有动力(弥散) 固体培养基：菌落 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，形成的肉眼可见的群体； 特征： 菌落特征因种而异； 大小、形状、光泽度、颜色、透明度、硬度等。 功能： 定义： 2、菌落 鉴定菌种的重要依据 3.培养基的基本成分： 水、碳源、氮源、无机盐 ⑴碳源 无机碳源： 有机碳源： CO2、CO32-、HCO3- 糖类、脂肪（牛肉膏、蛋白胨）等 自养微生物 异养微生物 ⑵氮源 无机氮源： 有机氮源： N2、NH3、NH4＋、NO3-等 尿素、氨基酸、（牛肉膏、蛋白胨）等 4、特殊要求： 还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求． 例如。。。。 2、无菌范围： 1、实验操作空间、操作者的手、衣着消毒 2、实验用具灭菌 3、实验操作过程 （二）无菌技术： 防止外来杂菌的污染 酒精灯旁操作 超净工作台 4、避免已灭菌材料用具与周围物品接触 1、无菌： 无杂菌污染 耐高温需保持干燥的 物品（培养皿） 接种环、接种针等金属 用具、试管口、瓶口 70~75℃、30min 80℃、15min 100℃、5~6min 消毒 灭菌 定义 方法 较为温和理化方法， 杀死部分有害菌体 （不包括芽孢、孢子） 强烈的理化方法， 杀死所有微生物 （包括芽孢、孢子） 煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药剂 灼烧灭菌 干热灭菌 酒精、氯气、石炭酸等 高压蒸汽灭菌 （二）无菌技术： 防止外来杂菌的污染 3、消毒与灭菌： 紫外线 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 答：有效避免操作者自身被微生物感染。 答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 P15——16旁栏思考 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml Nacl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算： 依配方计算各成分的用量 2.称量： 3.溶化： 牛肉膏黏稠，用称量纸称取 牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖 牛肉膏连同称量纸、少量水加热溶解 →取纸 →蛋白胨、NaCl →琼脂（不断搅拌） →补水定容 4.灭菌： 5.倒平板： 培养基（高压蒸汽灭菌） 二、实验操作 （大肠杆菌的纯化培养） 培养皿（干热灭菌） 调节好pH值 倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。 倒平板操作的讨论 1.培养基灭菌后要冷却到50OC时倒平板。用什么办法来估计培养基的温度？ 用手触摸锥形瓶，温度下降到刚刚不烫手即可 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠。将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染； 又可避免培养基中的水分过分挥发。 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿