[讲义]高效液相色谱!素材.ppt

2、20世纪20年代，许多植物化学家开始采用色谱方法对植物提取物进行分离，色谱方法才被广泛的应用。 3、30～40年代发表了薄层色谱、纸色谱的论文。 4、40年代瑞典科学家Tiselius等在分配液相色谱、吸附色谱和电泳领域取得了成果。 5、50年代英国Martin和Synge建立GC色谱。 6、60年代GC-MS联用分析已不能满足分析测试的要求。 7、70年代HPLC崛起，气相色谱和高效液相色谱，逐步成为各行各业必不可少的分析工具，广泛应用于各个生产领域。 思考题 思考题 1. 何谓梯度洗脱？它与气相色谱中的程序升温有何异同之处？ 2.为什么作为高效液相色谱仪的流动相在使用前必须过滤、脱气？ 思考题 液相色谱有几种类型? 思考题 1.从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相色谱及液相色谱的异同点？ 2.高效液相色谱有哪几种定量方法，其中哪种是比较精确的定量方法，并简述之。 注意事项 1、流动相的配制所需玻璃仪器和容器，每次临用前需要用纯水清洗干净后，再用无水乙醇冲洗三次，阴（烤）干、冷却后方可使用。先抽滤、后超声（10-15分钟） 。 2、测定法要求样品进样前先混匀，再用0.45μm滤膜过滤，再混匀后进样。对照品与样品进样量要尽量保持一致。平行进针要求RSD2％。进样针每次改进不同样品或对照品时，需用色谱甲醇涮洗五次以上，涮洗位置要超过进样量位置。 注意事项 3、仪器使用过程中注意事项注意机器异常情况的发生（声音），压力是否过高（超过200Bar不可再做实验），流动相是否流空、废液瓶是否已满等等。 4、实验完毕后用甲醇冲洗一小时，如果流动相中含有酸或缓冲盐，则先用新鲜纯水：甲醇=90：10的流动相冲洗0.5小时，再用甲醇冲洗一小时。 注意事项 5、人参、西洋参等含量测定做波长小于240nm的样品时，注意机器、柱子一定要加长冲洗时间，乙腈则改用进口乙腈。 6、保留时间改变的样品用于实验时间加长，导致对照品与样品保留时间不一致时，在实验最后加进一针对照品，或采用对照品加样品同时进样的叠加法进样，对照峰面积是否为两者之和。 盐酸表柔比星 三甲基硅烷柱 注射用盐酸表柔比星 注射用头孢他定 二羟基丙基硅烷键合硅胶柱 度米芬滴丸 苯乙烯-二乙烯基柱 胰激肽原酶 凝胶柱（测纯度） 1、反相键合相色谱法（RPBPC） 固定相：采用极性较小的键合固定相，如硅胶-C18H37（ODS，C18）、硅胶-苯基等 二、化学键合相色谱法（CBPC） 流动相：采用极性较强的溶剂，如甲醇、乙睛-水、水和无机盐的缓冲溶液等。 分离机理——疏溶剂作用理论 非极性的烷基键合相 ——硅胶表面的十八烷基“分子毛” ——较强的疏水特性。 二、化学键合相色谱法（CBPC） 1、反相键合相色谱法（RPBPC） 分子中非极性部分——疏水烷基——缔合作用，分子保留 分子极性部分——极性流动相——离开固定相，减小保留 两种作用力之差，决定分子在色谱中的保留行为 流动相——极性溶剂 分离物——极性官能团有机物 改变流动相配比可分离极性化合物 用水和无机盐的缓冲液为流动相可分离易离解的样品有机酸、有机碱等。 用途 1、反相键合相色谱法（RPBPC） 主要用于分离非极性至中等极性的各类有机化合物 二、化学键合相色谱法（CBPC） 固定相：极性的有机基团，CN、NH2。双羟基等键合在硅胶表面 流动相：非极性或极性小的溶剂（如正已烷）中加入适量极性溶剂（如氯仿、醇等） 分离机理：范德华力、诱导力或氢键力 用途：多用于分离极性或中等极性化合物 2、正相键合相色谱法（NPBPC） 二、化学键合相色谱法（CBPC） 3、离子键合相色谱法 固定相：硅胶为基质，键合各种离子交换基团，如一SO3H、一CH2NH2、－C00H 流动相：一般采用缓冲溶液。 二、化学键合相色谱法（CBPC） 分离原理：与离子交换色谱类同 用途：多用于分离离子型化合物如酸、无机阴阳离子、氨基酸等 分离原理：物质在固定相上的吸附作用不同 三、液-固吸附色谱法(LSAC) 固定相：吸附活性强弱不等的吸附剂硅胶、氧化铝、聚酸胶等。 流动相：各种极性的洗脱剂 用途：非极性溶剂中、具有中等相对分子质量且为非离子型的试样。 特别适用于分离异构体 原理：不同待测离子对固定相亲和力的差别 固定相： 基质：合成树脂（聚苯乙烯）、纤维素和硅胶 表面键合离子：阳离子和阴离子交换树脂 四、离子交换色谱法（IEC） 流动相：一定pH和盐浓度的缓冲溶液 用途：适用无机离子、有机离子混合物的分离例如氨基酸、核酸、蛋白质等生物大分子。 固定相： 化学惰性的多孔性材料，如聚苯乙烯凝胶、亲水凝胶、无机多孔材料。 流动相： 作用不是为了控制分离，而是为了溶解样品或减