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通过实验对比，加强对抗凝剂的认识摘要：通过不同的抗凝剂对实验影响，加强学生对实验每一环节的重视，同时通过实验对比来提高学生对实验的兴趣，从而达到实验教学目的：精细、严谨。以枸橼酸钠与肝素分别制备血浆，对教材中《血浆纤维蛋白测定复钙双缩脲法》的实验影响来提高学生对抗凝剂的重视为例。关键词：血浆 抗凝剂 枸橼酸钠 肝素抗凝剂的问题是在《自拟中药方剂对实验性动脉硬化及血栓治疗作用研究》科研中测定生化指标时遇到的。用不同抗凝剂制备血浆对本科研中的生化指标测定是有影响的，就此问题翻阅了教材，查阅了有关资料，从而保证了在抗凝剂这一环节不会出现差错。从科研中联想到我们实验教学，在《生化检验技术》的教学中，对学生在实验课时被测物用的是血浆还是血清，用不同抗凝剂的血浆，对本次实验有何种影响，不太重视。平时血浆制备都是按教材规定操作的。为了加强学生对实验每一个环节的重视，以枸橼酸钠与肝素分别制备血浆，对教材中《血浆纤维蛋白测定复钙双缩脲法》的实验有明显影响，来提高学生对抗凝剂的重视。从而树立学生对实验的严谨态度。本次实验，要求从加入不同种和不同量的抗凝剂制备的血浆开始，一直到测定吸收光度计算纤维蛋白含量，都让学生亲自动手，从而使学生对不同抗凝剂制备血浆对生化实验的影响有深刻认识，在以后工作中不会因抗凝剂出现差错。一、实验目的验证抗凝剂枸橼酸钠与肝素分别制备的血浆对实验《血浆纤维蛋白测定复钙双缩脲法》的影响。二、实验原理于稀释的两种血浆中分别加入钙离子，在使纤维蛋白原转化纤维蛋白使其凝聚形成絮状物的试管中，吸入双缩脲试剂来测定纤维蛋白含量，从而验证哪种抗凝剂适合此实验。三、实验试剂225.2mmol/l氯化钙溶液、生理盐水、双缩脲试剂、蛋白标准液。枸橼酸钠抗凝剂制备的血浆（B1）、肝素钠制备的血浆（B2）。四、实验器材一次性试管1.5×10cm、小玻璃棒、0.5ml、5ml刻度吸管、微量加液器五、实验步骤1.表12.将上述试管1中的絮状物用小玻璃棒卷起，并轻轻转动玻璃棒，在试管壁上轻轻挤压，这样絮状物裹在玻璃棒上，用滤纸小心吸干絮状物上液体。3.取一支试管（测定管），加入生理盐水0.1ml，双缩脲试剂5ml，然后，把裹着絮状物的小玻璃棒放入其中，置37℃水浴中不断搅动玻棒，直到纤维蛋白絮状物完全溶解。此时不要着急，如果絮状物没有完全溶解会影响测定的含量。4.取两支试管（标准管），加入10倍稀释的蛋白标准液0.1ml（生理盐水：蛋白标准液体积比为9?U1），双缩脲试剂5ml。5.取第三支试管（空白管），加入蒸馏水0.1ml，双缩脲试剂5ml，见表2。6.将以上3支试管混匀后，置37℃水浴10分钟，然后取出，用540nm波长，以空白管调“0”，读出吸光度A（标）、A（测）。7.根据公式计算含量复钙双缩脲法测定血浆蛋白的含量这种方法无疑义，但我们应该看到本次实验用到的是血浆，提到血浆就应该考虑到抗凝剂。从实验步骤1可以看到一次性试管1与一次性试管2的结果，如果预先不认真做预习，按照一次性试管2的结果，以下实验操作无法进行。从而可以看到不同抗凝剂制备的血浆对生化实验的重要性。分析原因：首先，对抗凝过程做简单概述：凝血酶原激活物的形成（Xa、V、Ca2+和PF3复合物）促使凝血酶原形成（血浆中无活性的因子Ⅱ被激活为有活性的因子Ⅱ）促使纤维蛋白的形成（絮状物）。其次，枸橼酸的抗凝过程：枸橼酸根与血中钙离子形成难解离的络合物，钙离子是凝血过程中所需的物质之一，血液中钙离子减少，使血液凝固受阻。而肝素钠的抗凝过程：肝素钠是一种含有硫酸根的粘多糖，带强大的负电荷，能干扰血凝过程的许多环节，在体内外都有抗凝血作用。其作用机制比较复杂，主要通过与抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）结合，而增强后者对活化的Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ和Ⅻ凝血因子的抑制作用。其后果涉及阻止血小板凝集和破坏，妨碍凝血激活霉的形成；阻止凝血酶原变成凝血酶；抑制凝血酶，从而妨碍纤维蛋白原变成纤维蛋白。《临床检验学》教材中可以查到。了解两种抗凝剂的作用机理，我们就不难分析上述实验结果的不同。枸橼酸钠抑制凝血过程中的钙离子，如果在体外环境中加入适量的钙离子，那么凝血过程又被激活，最终有纤维蛋白絮状物形成。肝素钠抗凝是抑制凝血因子阻碍凝血酶的形成，即使加入钙离子，抗凝过程也不会被激活。从而也就不会有纤维蛋白絮状物形成。上述生化实验过程虽简单明了，但是在实验前学生应有充分的预习，这是学生应养成的良好习惯。抗凝剂的知识在《临床检验学》中已学习过，那么就应该使知识相互贯通。培养学生对待实验不仅要有严谨的态度，而且还要有科学理论做根基。“授人以鱼不如授人以渔”，这是我们当代教师应该遵循的教育理念。参考文献：[1]沈岳奋.生物化学检验技术.[2]赵桂芝.临床检验.4