微生物实验问题与答案..docVIP

微生物实验问题与答案 一、光学显微镜的操作及细菌、放线菌个体形态的观察 1、为什么油镜的放大倍数比普通物镜大？ 答：油镜能减少光的折射，进而提高视野的亮度；通过提高显微镜的数值口径增加显微镜的分辨力。 2、数值口径的表达公式？ 答案：N.A=n ×sin α，n为介质折射率；α为光线最大入射角的半数。 3、显微镜数值口径与分辨力的关系？ 答案：分辨力是指显微镜能辨别两点之间最小距离的能力，它与光的波长成反比，与数值口径成正比。 4、油镜的使用与普通物镜有何不同？ 答案：油镜必须借助于光折射率等于或接近于玻璃的试剂，如香柏油等才能使用，而普通物镜则不需要；油镜是由100×物镜与香柏油构成，而普通物镜则限于10×物镜、40×物镜等。 5、使用油镜时应特别注意什么？ 答案：上下调节镜头时应使用微螺旋，否则容易损坏镜头；应使油镜始终浸泡在香柏油中，否则就不是油镜；使用完毕后，必须用搽镜纸沾取二甲苯等有机溶剂搽去残留的油迹，否则会玷污油镜。 二、微生物染色 1、单染色的原理是什么？ 答案：主要基于微生物细胞能与各种染料进行不同程度地结合。 2、单染色过程中，为什么干燥固定？ 答案：因为通过干燥可以使菌体蛋白变性，细胞质凝固，进而可以使菌体紧密地附着于载玻片表面。 3、单染色过程中，为什么水洗时水流要缓慢地从载玻片上端流下？ 答案：因为如果水流直接冲洗有菌部位，容易使菌体被冲洗掉。 4、为什么载玻片要完全干燥后，才能使用油镜？ 答案：因为香柏油与水不相溶，容易造成光线发生折射或散射，一方面无法构成油镜，另一方面也会降低视野的亮度。 5、革兰氏染色的原理是什么？ 答案：对于G+细菌来说，当用乙醇脱色时，由于肽聚糖含量高，网孔小，再加上脂量低，所以乙醇脱色后，进一步地缩小了网孔，结晶紫-碘复合物无法脱出，第二次用番红染色时无法着色，进而呈紫色；对于G-细菌来说，当用乙醇脱色时，由于肽聚糖含量低，网孔大，再加上脂量高，所以乙醇脱色后，进一步地扩大了网孔，结晶紫-碘复合物被脱出，第二次用番红染色时着色，进而呈红色。 6、革兰氏染色时，为什么要加碘液？ 答案：碘可以与结晶紫染料形成较大的复合物，从而可以阻止结晶紫向细胞外渗透；另一方面也可以增加结晶紫与细胞质的亲和力。 7、革兰氏染色时，为什么要用酒精冲洗？ 答案：加酒精是为了溶解细胞壁中的脂类和脱去细胞内的有机染料。 8、革兰氏染色时，为什么不能涂片太厚？ 答案：涂片太厚，容易使菌体重叠，造成假阳性。 9、革兰氏染色时，为什么说脱色是最关键的一步？ 答案：如果脱色时间较短，则容易使革兰氏阴性细菌脱色不完全，造成假阳性；如果脱色时间较长，则容易使革兰氏阳性细菌内的染料被脱出，造成假阴性。 10、革兰氏染色时，如何证明你的染色操作是正确的？ 答案：将革兰氏阳性细菌—葡萄球菌与革兰氏阴性细菌--大肠杆菌制成混合涂片，经革兰氏染色后，如果葡萄球菌呈紫色，而大肠杆菌呈红色，则说明染色操作是正确的。 三、无菌操作（补充） 1、无菌操作过程中，为什么试管或三角烧瓶在开塞或回塞之前，口部要过火几次？ 答案：这样可以烧去管口或瓶口的微生物。 2、开塞后的试管或三角烧瓶口部微生物要平放？ 答案：如果口部向上或朝下，则容易通过空气对流污染培养物。 3、接种针接种前后微什么要过火焚烧？ 答案：主要防止微生物培养物之间交叉污染，也防止污染操作台面。 四、细菌的鞭毛染色及活细菌的运动性观察 1、细菌的鞭毛染色的原理 答案：细菌的鞭毛较细，在普通光学显微镜下无法观察。但可以通过对鞭毛进行染色，再结合染料堆积使鞭毛加粗，从而便可以在普通光学显微镜下观察鞭毛的形态。一定要充分洗净A液后再加B液，否则背景很脏，影响观察效果。 2、鞭毛染色时，应注意哪些环节？ 答案：用新培养的并且转接2-3次的菌种为易，因为老化菌种的鞭毛易脱落；载玻片要干净，防止鞭毛变态；挑菌时应不带培养基；干燥后应尽快染色防止鞭毛脱落。 3、细菌运动性观察时，菌液中的细菌与灰尘颗粒的运动有什么区别？ 答案：菌液中的细菌常常会由一个位置运动到另一个位置，而灰尘颗粒的运动属于布郎运动，位置基本不变。 4、一般运动性细菌的运动方式有几种？ 答案：细菌运动主要包括直线、波浪或翻滚式运动。 5、如何用悬滴法观察细菌运动？ 答案：悬滴法观察细菌运动。取干净的凹玻片与盖玻片个一块，并在盖玻片的四角涂少许凡士林。加一滴变形杆菌菌液于盖玻片中央，并轻轻翻转，使菌滴直对凹玻片凹陷处，轻压于凹玻片上。镜检，观察细菌的运动情况。在观察细菌运动时，应注意区分非菌颗粒与细菌细胞，前者的运动属于原地布朗运动，而后者做移位运动。 五、细菌的芽孢染色与夹膜染色 1、芽孢染色的原理是什么？用单染色可以看到芽孢吗？ 答案：由于芽孢壁厚，不易着色，所以须采用着色力强的染色剂，并需加热，以便提高芽孢壁的透