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实验十一 病毒的血清学实验 操作： 血凝实验 血凝抑制实验 实验目的 血凝试验：滴定病毒的血凝效价，采用一定的病毒量，通常采用4个血凝单位。 血凝抑制试验： 应用标准病毒液测定血清中的相应抗体或应用特异性抗体鉴定新分离的血凝性病毒。 血凝试验原理 血凝素（hemagglutinin HA）：由病毒基因编码的糖蛋白刺突。与病毒吸附和传入宿主细胞有关。HA能与人或其它动物多种红细胞表面N－乙酰神经氨酸酶受体结合引起红细胞凝集。 血凝试验结果判定 效价判定： 凝集特别显著：“＋＋＋＋” 凝集现象次之：“＋＋＋” 凝集清楚可见：“＋＋” 稍显凝集者：“＋” 血凝效价：呈“＋＋”凝集时的最高稀释度。此时的稀释度即为1个血凝单位。 血凝抑制试验原理 病毒引起的血凝现象能被相应的抗血凝素抗体所抑制，称血凝抑制。利用血凝素特异性抗体与病毒表面相应的HA相互作用，使病毒血凝现象抑制的试验称血凝抑制试验。 血凝抑制试验结果判定 测定孔 RBC沉于孔底中心，呈纽扣状。(+) 凝集 （-） 血清对照孔：RBC沉于孔底，无自凝 病毒对照孔：凝集 RBC对照孔：无自凝 血凝抑制试验效价：呈完全血凝抑制使的最高血清稀释度。 思考问题 血凝试验中为什么要加补充液？ 为什么加病毒液和红细胞悬液时要反向加？ 血凝试验和血凝抑制试验中空白对照的意义？ * * 0.2弃掉 各0.4ml 鸡红血球细胞悬液（ml） 各0.2ml 补充液（ml） 对照 1∶2560 1∶1280 1∶640 1∶320 1∶160 1∶80 1∶40 1∶20 1∶10 病毒稀释度 0.2 0.2 + 0.2 0.2 + 0.2 0.2 + 0.2 0.2 + 0.2 0.2 + 0.2 0.2 + 0.2 0.2 + 0.2 0.2 + 0.2 0.2 + 0.2 生理盐水（ml） 尿囊液 （ml） 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 孔号 血凝试验（血凝效价的滴定) 将有机玻璃板孔从1~10进行编号，从第1孔起至第10孔，每孔加生理盐水0.2ml。 将尿囊液按下表进行稀释。 自第10孔开始反方向向前每孔补充0.2ml生理盐水。(WHY?) 自第10孔开始反方向向前每孔加入0.5%鸡红血球0.4ml，摇匀后放置室温45分钟 0.2弃掉 0.2ml 各0.4ml 鸡红血球细胞悬液（ml） 各0.2ml 4个单位病毒液（ml） 1∶640 1∶320 1∶160 1∶80 1∶40 1∶20 1∶10 抗血清稀释度 0.4 0.2 0.2 + 0.2 0.2 + 0.2 0.2 + 0.2 0.2 + 0.2 0.2 + 0.2 0.2 + 0.2 0.2 + 0.2 0.2 + 0.2 生理盐水（ml） 抗血清 （ml） 红细胞对照 病毒对照 血清对照 7 6 5 4 3 2 1 孔号 血凝抑制试验 从第1孔起至第9孔，每孔加生理盐水0.2ml，第10孔加0.4ml。 抗血清按下表进行稀释，第8孔为血清对照。 于第1孔至第7孔中各加入0.2ml 4个血凝单位的病毒液，第9孔亦加入0.2ml病毒液作病毒对照。 稍加震摇后，每孔加入0.5%鸡红细胞0.4ml，室温静置45分钟。 血凝原理 血凝抑制原理 *