FAK在胃肠道间质瘤组织中的表达及其与诊断治疗关系的研究.docVIP

FAK在胃肠道间质瘤组织中的表达及其与诊断治疗关系的研究 　　胃肠间质瘤是胃肠道最常见的间叶源性肿瘤，由于基于肿瘤大小以及核分裂数的提出，单纯的用良性和恶性定义胃肠间质瘤已经没有任何的意义[1]。随着诊断标准的精确化，以往多种消化道肿瘤在相关临床诊断指标中均与GIST相同，应归属于GIST[2]。胃肠道间质瘤的发病和丝氨酸激酶的过度激活有关，免疫组化检测发现GIST过表达CD117和DOG1，并且大多数病例具有C-Kit基因扩增现象[3]，KIT 或者PDGFRA基因的持续激活可以启动细胞的过度增殖[4]。然而，在一些KIT 或者PDGFRA基因正常的GIST患者中，琥珀酸脱氢酶亚型SDHx（SDHA， SDHB， SDHC， and SDHD）也被证实发生了致病性突变[5]。GIST的发病也和细胞周期的紊乱有关，MDM2或者TP53发生突变，导致细胞周期调节紊乱，这种现象在高危险的胃肠间质瘤中尤其常见[6]。除此以外，一些常见的胃癌致病的环境因素，诸如饮酒、不良饮食习惯亦可能成为胃肠间质瘤的诱导因素[7]。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 收集2012年1月～2015年10月在南昌大学第一附属医院行根治性手术的40例胃肠间质瘤患者的临床病理资料，见表1。2014年10月～2015年3月在我院行根治性手术的3例胃肠间质瘤患者的临床病理资料，所有入组患者病历资料完整，手术前均未进行化疗，避免由于放疗导致的病理及其生理变化。所有研究对象术后病理诊断明确，均按照美国癌症联合委员会（AJCC）2010年出版的《AJCC癌症分期手册》（第2版）进行胃肠间质瘤侵袭危险程度分期。 　　1.2免疫组化方法 免疫组织化学采用免疫学原理，将制好的切片经过带有标记的抗体孵育后显色，以观察相关的蛋白表达量。本课题中采用的是PH 6.0的柠檬酸盐修复、DAB显色的方法，用PBS代替一抗作为阴性对照。染色结束后，用苏木素进行复染，以使颜色更加鲜艳。 　　1.3 Western-Bolt采用10%的聚丙烯酰胺凝胶电泳，使用兔源抗FAK一抗（ abcam 40794），再用HRP标记的抗兔的二抗（WB150614）与一抗结合，在凝胶成像系统中成像。 　　1.4结果判读标准 免疫组织化学染色评分系统采用德国半量[8]评分：在光学显微镜下在200×及400×下观察切片面积及阳性染色强度。显微镜下观察到胞浆和（或）胞核呈棕色或黄色判定为阳性着色，阳性细胞数比率75%，与阴性对照比较着色强度分四级：0、1、2、3分，无染色为阴性 （0分），细胞浆和（或）细胞核呈淡棕色为弱阳性 （1分），呈棕色者为阳性（2分），深棕色为强阳性 （3分），然后根据阳性细胞数比率和染色强度得分的乘积将组织染色结果进行评分分级：0～1为阴性（-），2～4为弱阳性（+），5～8为阳性（++），9～12为强阳性（+++）。 　　1.5统计方法 使用SPSS 20.0（IBM）统计软件进行统计学分析，所有统计的资料均采用双侧检验，P值0.05将认为所检验的数据差异有统计学意义。实验数据包括计数资料和计量资料。免疫组化检测FAK表达情况的实验总所获得的计数资料采用卡方检验比较二者之间构成比的差异。 　　2 结果 　　2.1免疫组化结果 　　2.1.1 不同侵袭危险程度组FAK的表达水平 胃肠间质瘤组织中存在FAK的表达，定位于间质的细胞浆，不同侵袭危险程度组FAK表达水平不同，见图1，统计学分析组间差异有统计学意义（χ2=19.827，P0.01）。 　　图1 不同侵袭危险程度组FAK免疫组化染色图片，A为高危险度GIST，B为中危险度GIST，C为低危险度GIST，D为极低危险度GIST 　　2.1.2 胃肠间质瘤组织中FAK的表达与胃肠间质瘤患者性别和年龄的关系 将FAK的表达水平与胃肠间质瘤患者的性别和年龄分组进行比较，年龄（χ2=0.131，P0.05），性别（χ2=0.162，P0.05），差异均无统计学意义，见表2。 　　2.1.3胃肠间质瘤组织中FAK的表达量与胃肠间质瘤相关临床病理参数的关系 使用统计学的方法分析胃肠间质瘤的肿瘤部位、侵袭危险程度和细胞类型与FAK表达水平的关系，统计结果显示：FAK的表达量在不同级别的胃肠间质瘤中（P=0.08）、肿瘤部位（P=0.664）和细胞类型（P=0.093）的差异无统计学意义（P0.05），见表3。 　　由于在侵袭危险程度中我们采用了不同级别的分类方法，并且其表达差异的P值非常接近0.05，所以我们对不同级别的胃肠间质瘤按照AJCC的胃肠间质瘤划分方法进行进一步的细分，得到以下评分等级资料，其P值等于0.016，小于0.05，差异具有统计学意义。其表达情况统计结果如图2。 　　图2 不同侵袭危