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HPLC―ICP―MS测定水产品中五种砷形态 　　摘 要：采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用仪对水产中砷的5种形态进行测定， 结果表明，采用Hamilton PRP-X100 型色谱柱，磷酸氢二铵为淋洗液，能将水产中5种形态的砷很好地分离。该方法简便快速，具有标准曲线线性好、范围宽，分析速度快，检出限低，精密度好、回收率高，灵敏度符合要求。 　　关键词：水产品；砷形态；高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱仪 　　引言 　　砷是一种广泛存在于环境、食品中的有毒并致癌的元素，其中水产品砷含量较高，也是人体摄入的主要来源。研究表明，不同形态砷具有不同理化性质导致其毒性不同，无机砷毒性最大，如亚砷酸根（AsⅢ）、砷酸根（AsV）；有机砷毒性较小，如二甲基砷（DMA）、一甲基砷（MMA）；砷甜菜碱（AsB）通常认为无毒。因此对测定砷含量时进行砷形态分析十分必要，对水产品中无机砷的检测可直接反应出其安全性。 　　1 实验部分 　　1.1 实验仪器及试剂 　　1100型四元泵液相色谱-电感耦合等离子体质谱联仪（7700x），安捷伦科技有限公司产品；离心机，贝克曼库尔特公司；pH计，梅特勒公司；恒温水浴锅，金坛市医疗仪器厂；C18型净化小柱（OnGuardⅡRP柱）；0.22μm微孔有机滤膜。 　　磷酸二氢铵、硝酸、正己烷、甲醇，均为优级纯；亚砷酸[As（Ⅲ）]标准品75.83μg/g、砷酸[As（Ⅴ）]标准品17.48μg/g、二甲基砷（DMA）标准品52.95μg/g、一甲基砷（MMA）标准品25.1μg/g，神甜菜碱[AsB]标准品38.8μg/g，中国计量科学研究院产品；调谐液：stock Tuning solution for ICP-MS7500 cs ，1μg/L，Agilent Technologies产品。试验用水为超纯水系统，电阻率大于18.2MΩ.cm/25℃。 　　1.2 仪器条件 　　（1）色谱参数。色谱柱：Hamilton PRP-X100型，250 mm×4.1 mm，10μm；保护柱：Hamilton PRP-X100型，25mm×2.3mm，10μm；流动相A：10mmol/L NH4H2PO4（用氨水调节pH值8.25），流动相B：无水乙醇，等度洗脱：A-B（99：1）；流速：1.0mL/min；进样体积：50μL。 　　（2）电感耦合等离子体质谱仪参数。安捷伦科技有限公司7700x电感耦合等离子体质谱仪，采样模式为TRA，进样系统采用同心MircoMist雾化器，镍采样锥和截取锥。独特的氦（He）碰撞模式排除几乎所有的多原子离子干扰、全新数字控制式射频匹配的RF发生器和第三代八极杆碰撞/反应池系统（ORS3）和四极杆质量分辨器，检测质量数为m/z=75（As），m/z=35（Cl），元素的积分时间为0.5s。主要工作参数见表1。 　　注：氩气纯度99.99%以上；氦气纯度99.99%以上。 　　1.3 实验方法 　　1.3.1 标准溶液的配制 　　精密称取五种砷形态的标准品适量，先用超纯水制备成浓度为1000ng/mL（以As计）的各形态储备液，再精密吸取五种形态的储备液，用超纯水稀释制备七个浓度梯度的混合标准溶液，浓度分别为0，2.5，5，10，20，50，100ng/mL。在色谱条件下，以质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 　　砷的5种形态标准溶液色谱图见图1。 　　1.3.2 样品前处理 　　称取打匀后的水产品试样1.0 g（精确至0.001 g），置于50 mL塑料离心管中，加入20 mL浓度为0.15 mol/L的硝酸溶液，密塞。于60 ℃恒温水浴振荡器中热浸提2.5 h，每隔 0.5 h振摇1min，取出冷却至室温。10000 r/nim离心10 min，取7ml上清液至离心管中，加7ml正己烷，振摇1min后，10000 r/nim离心10 min，弃去上层正己烷，按此过程重复一次，吸取下层清液用0.22μm有机滤膜过滤及OnGuardⅡRP柱净化后，用HPLC-ICP-MS检测。同法制备样品空白。 　　1.3.3 仪器测定方法和计算 　　在仪器的最佳工作参数条件下，按仪器操作规程，取七个浓度混合标准溶液，分别进样50μL，记录总离子流色谱图，以色谱图中五种砷形态色谱峰的峰面积为纵坐标，相应的质量浓度为横坐标，作为工作曲线。各样品溶液也分别进样50μL，通过标准曲线校正五种砷形态的浓度，并根据稀释倍数，计算样品中砷形态的含量。 　　2 结果与讨论 　　2.1 方法学验证 　　2.1.1 校准曲线和检出限 　　取混合标准溶液，用超纯水稀释为2.5ng/mL级别的标准溶液，用仪器进行分析测定，得出总离子流色谱图中各形态色