血红蛋白含量的测定课件.pptVIP

实验目的要求 掌握比色法测定血红蛋白含量的方法。 基本原理 血红蛋白是红细胞的主要成分，在正常情况下，每个红细胞均含有一定量的血红蛋白。血红蛋白是由珠蛋白和亚铁血红素组成的结合蛋白质。血红蛋白除能与氧结合形成氧合血红蛋白外，尚能与某些物质作用形成多种血红蛋白衍生物。它们具有特定的色泽和吸光谱，在临床上，可用以诊断某些变性血红蛋白血症和血红蛋白的定量测定。 测定血红蛋白含量的方法很多，实验常用比色法。其原理是在一定量的血液中，血红蛋白经少量盐酸的作用，使亚铁血红素变成高铁血红素，呈现较稳定的棕色。用水稀释后与标准色比较，求出每100ml血液中所含的血红蛋白克数。正常成年男子每100ml血液平均含14.4g，女子为13.1g。 测定血红蛋白的意义 人血红蛋白参考值 成年男性：13--15克/dl ；成年女性：11--14克/dl ；儿童：（依年龄而异）12--14克/dl。 临床意义：大致与红细胞增减相似。高原地区居民的血红蛋白浓度一般比平原居民为高，这是机体对低气压环境的一种适应现象。一般来说，在疾病状况下，血红蛋白的增减是与红细胞的改变相平行的，即引起红细胞增多的疾病，也会使血红蛋白含量增加。使红细胞减少的疾病，也使血红蛋白含量减少。在贫血时，血液中的红细胞数量和血红蛋白浓度都有不同程度的下降，但不一定按相同的比例变化。有时红细胞数量可以减少很多，而血红蛋白的浓度的降低却相对地不那么显著，见于大细胞性贫血，由于单个红细胞所含的血红蛋白量较正常者为多。相反，也有的红细胞减少得不很多，而血红蛋白浓度却显著降低，例如缺铁性贫血，这是由于每个红细胞的血红蛋白含量比正常明显减少，故血红蛋白减低的程度较红细胞减少更为显著。 依据检验结果，分析病因，做到准确的诊断和治疗都是很必要的。 实验器材 血红蛋白计、0.1mol/LHCl、刺血针、滤纸片、酒精棉球、乙醚、95%酒精、蒸馏水。 方法与步骤 血红蛋白计包括 ①标准比色架，架的两侧镶有两个棕色标准玻璃色柱。 ②血红蛋白稀释管，有方形也有圆形的。两侧有刻度，一侧以g为计数单位，对侧以百分率计，按我国情况，是以每100ml血液内含血红蛋白14.5g为100%。③20mm3血红蛋白吸管，还有玻璃棒、滴管。 用滴管加0.1mol/LHCl于血红蛋白稀释管内，到刻度10处。 用刺血针刺破指尖采血，血滴宜大些。用血红蛋白吸管的尖端接触血滴，吸血至刻度20mm3处（0.02ml）。　 方法与步骤 用滤纸片或棉球擦净吸管口周围的血液，将吸管插入血红蛋白稀释管的盐酸内，轻轻吹出血液至管底部，反复吸入并吹出稀释管内上层的盐酸，洗涤吸管多次，使吸管内的血液完全洗入稀释管内。摇匀或用小玻璃棒搅匀后，放置10min，使盐酸与血红蛋白充分作用。 把稀释管插入标准比色架两色柱中央的空格中，使无刻度的两侧面位于空格的前后方，便于透光和比色。 用滴管向稀释管内逐滴加入蒸馏水（每加一滴要搅拌），边滴边观察颜色，直至颜色与标准玻璃色柱相同为止。稀释管上液面的刻度读数即为每100ml血液血红蛋白的克数。 注意事项 吹血液入稀释管及洗净吸管时，不宜用力过猛。 蒸馏水需逐滴加入，多做几次比色，以免稀释过量。每次比色时，应将搅拌用的玻璃棒取出，以免影响比色。 由于操作过程过长而造成吸管内血液凝固，堵塞管孔时，则要按下列溶液的顺序重复冲洗吸管，即用水→95%酒精→乙醚或丙酮。 Central Laboratory of Biology College of Life Sciences, Hubei Normal University College of Life Sciences Central Laboratory of Biology 动物学教研室 College of Life Sciences 血红蛋白含量的测定 Hubei Normal University 生命科学学院 Thanks for your attention! College of Life Sciences Central Laboratory of Biology College of Life Sciences, Hubei Normal University College of Life Sciences Central Laboratory of Biology