人参皂苷Rg3不同构型对肝癌小鼠抗氧化能力的比较研究.docVIP

人参皂苷Rg3不同构型对肝癌小鼠抗氧化能力的比较研究 　　摘要：目的 比较人参皂苷Rg3旋光异构体即[20（S）-Rg3和20（R）-Rg3]对小鼠肝癌H22荷瘤小鼠抗氧化能力的影响。方法 通过建立肝癌H22实体瘤模型，腹腔连续给药干预，检测瘤重。利用试剂盒检测其超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XOD）和丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量。结果 20（S）-Rg3和20（R）-Rg3能显著抑制肝癌H22实体瘤的生长，抑瘤率分别为23.6%和40.9%，增强肝癌小鼠SOD活性（P0.05），降低肝癌小鼠XOD活性和MDA含量（P0.05）。结论 Rg3改善机体内抗氧化能力，具有抗肿瘤作用，且20（R）-Rg3的抗肿瘤和抗氧化作用优于其异构体20（S）-Rg3。 　　关键词：人参皂苷Rg3；抗氧化；肝癌H22细胞 　　人参是传统的名贵中草药，在东方国家被广泛用于医疗保健，被誉为百草之王。人参皂苷是人参的主要活性成分，如人参皂苷Rb1、Rb2和Rg3等[1]。其中人参皂苷Rg3属原人参二醇型皂苷，其存在两种同分异构体，即20（S）-Rg3和20（R）-Rg3[2]，它们的生物学活性存在差异。目前，研究表明它们对内皮细胞凋亡[3]、免疫佐剂作用[4]的影响存在明显的差异。但有关它们对荷瘤小鼠抗氧化作用的比较研究尚未见报道，这影响了人参临床应用的疗效。因此，本文拟建立肝癌H22实体瘤动物模型，系统地比较研究它们对肿瘤生长和抗氧化能力的影响，并探讨其抗肿瘤作用的机制，为人参皂苷Rg3在临床中的应用提供实验和理论基础。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 　　1.1.1实验动物 SPF级KM小鼠40只，雌雄各半，体重18～22g，由湖北省实验动物研究中心提供。由江汉大学动物实验中心提供SPF级饲养环境，温度为24±1°C，湿度为50±10%，自由饮水采食。 　　1.1.2试剂与耗材 肝癌H22细胞购于武汉大学动物实验中心；20（S）-Rg3和20（R）-Rg3购于中国食品药品检定研究院，纯度98%；SOD试剂盒、MDA试剂盒、XOD试剂盒购于南京建成生物工程研究所；其他试剂均为分析纯。 　　1.2方法 　　1.2.1构建实体瘤小鼠模型 断颈椎处死两只肝癌H22腹水瘤种鼠，无菌条件下取腹水瘤细胞并稀释1×106个/ml，各小鼠右腋下皮下接种0.2ml细胞悬液，即可建立肝癌H22小鼠移植瘤模型。 　　1.2.2实验动物的分组与给药 30只实验小鼠皮下接种后，随机分为3组（n=10）：模型对照组、20（R）-Rg3组、20（S）-Rg3组；另取10只正常小鼠设为正常对照组。24h后，正常对照组和模型对照组腹腔注射等量的生理盐水（0.2ml/10g/d BW），20（R）-Rg3组和20（S）-Rg3组腹腔注射20（R）-Rg3或20（S）-Rg3（0.3mg/kg/d BW）。连续给药10d后，所有实验鼠称重，颈椎脱臼处死。剥取皮下实体瘤称重，称重后分别按以下公式计算抑瘤率： 　　抑瘤率=[（对照组平均瘤重-给药组平均瘤重）/对照组平均瘤重]×100% 　　1.2.3SOD的测定 严格按SOD试剂盒说明书进行操作，OD550nm测吸光度值，按照以下公式计算SOD活力。 　　组织匀浆中SOD的活力： 　　SOD抑制率（%）=A对照-A对照空白-（A测定-A测定空白）（A对照-A对照空白）×100% 　　总SOD活力（U/mgprot）=SOD抑制率×反应体系稀释倍数（0.24ml）（0.02ml）÷待测样本蛋白浓度（mgprot/ml） 　　1.2.4XOD的测定 严格按XOD测定试剂盒说明书进行操作，OD530nm测吸光度值，按照以下公式计算XOD活性。 　　组织匀浆中XOD的活性： 　　组织中XOD活性（U/gprot）=ODU-ODB12.6×10-3×N×1c×t÷Cprot 　　1.2.5MDA的测定 严格按MDA测定试剂盒说明书进行操作，OD532nm测吸光度值，按照以下公式计算MDA含量。 　　组织中MDA的含量： 　　组织中MDA含量（nmol/mgprot）=测定OD值-对照OD值标准OD值-空白OD值×标准品浓度（10nmol/ml）÷待测样本蛋白浓度（mgprot/ml） 　　2数据统计 　　实验数据采用统计软件SPSS 19.0进行独立样本t检验方法进行组间比较，数据以平均值士标准误（x±s）表示，P0.05为有统计学意义。 　　3结果 　　3.1Rg3对肿瘤生长的影响 由表1所知，Rg3对肝癌H22瘤的生长有显著的抑制作用，且20（R）-Rg3的作用效果明显优于