分析如何运用高效液相色谱法测定粮食中T―2毒素含量的不确定度.docVIP

分析如何运用高效液相色谱法测定粮食中T―2毒素含量的不确定度 　　摘要：准确测定T-2毒素对于确保粮食的质量有着重要的作用。本实验根据JJF1059-1999《测量不确定度评定和表示》对高效液相色谱法测定粮食中的T-2毒素含量的不确定度进行评定，为建立有效的质量控制提供理论基础和科学依据。 　　关键词：高效液相色谱法；粮食；测定；T-2毒素；不确定度 　　1材料与方法 　　1.1主要试剂与仪器 　　甲醇、乙睛：色谱纯；4一二甲基氨基吡啶，1一蒽睛：分析纯；T-2毒素标准品：Biopure公司。 　　分析天平；均质器；氮吹仪；涡旋振荡器；高效液相色谱仪，配有荧光检测器。 　　1.2样品前处理 　　按照GB/T23501-2009《食品中T-2毒素的测定》进行。准确称取25.00g磨碎试样于容量瓶中，用提取液甲醇：水（80∶20）定容至100.0mL，混匀，转移至均质杯中，高速均质2min。用定量滤纸过滤，移取10.0mL滤液于50mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀，玻璃纤维滤纸过滤，收集滤液于干净容器中。移取10.0mL滤液过免疫亲和柱，再用10.0mL水淋洗免疫亲和柱，准确加入1.0mL甲醇洗脱。吹干洗脱液，加入50μL4-二甲基氨基吡啶和50μL1-蒽腈，涡旋混匀1min，50℃反应15min，冰水中冷却10min后，在50℃下氮气吹干，用1mL流动相溶解，高效液相色谱测定。 　　1.3色谱条件 　　色谱柱：C18柱；流动相：乙腈+水（75+25）；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；进样量：20μL；检测波长：激发波长381nm，发射波长470nm。 　　2结果与分析 　　2.1数学模型 　　式中：X为试样中T-2毒素的含量，单位为μg/kg；C为样液中T-2毒素的浓度，单位为ng/mL；V为样液体积，单位为mL；f为稀释倍数；m为样品质量，单位为g；frec为回收率校正因子。 　　2.2测定粮食中T-2毒素的不确定度来源及评定 　　2.2.1标准溶液引入的不确定度 　　（1）标准物质引入的不确定度 　　本实验用的T-2毒素标准溶液由Biopure公司提供，已知标准物质证书给出的T-2毒素的不确定度为0.003，按正态分布考虑，包含因子k=3，其相对不确定度为： 　　（2）玻璃量具引入的不确定度 　　按照JJG196-2006《常用玻璃量具检定规程》的要求，标准溶液配制过程中所使用的一系列玻璃量具都有相应的最大允许误差。其分布服从矩形分布，k= ，由此估算不确定度分量。 　　表1玻璃量具的不确定度 　　（3）标准溶液引入不确定度的合成 　　T-2标准溶液引入的不确定度为： 　　2.2.2样品称量引入的不确定度 　　按照方法要求，本实验采用百分之一天平，天平校准的最大允许误差为±0.01g，按矩形分布考虑，k= ，其不确定度为u7=0.01/ =0.00577。本实验中样品的称样量为25.00g，称量过程中所产生的相对标准不确定度为： 　　2.2.3体积引入的不确定度 　　由体积引入的不确定度主要包括两方面，一是由稀释因子引入的不确定度，即样品的处理过程中涉及到稀释，稀释涉及到一系列玻璃量具，此不确定度是由玻璃量具引入的；二是由最终定容体积引入的不确定度。按照（2）中的方法对其产生的不确定度进行评定。 　　表2玻璃量具的不确定度 　　由玻璃量具引入的相对不确定度为： 　　2.2.4样品处理过程引入的不确定度 　　样品处理过程引入的不确定度包括由操作过程中均质、过滤、定容、净化、氮吹、衍生等步骤，其中每一步操作都会引起不确定度，影响不确定度因素较多。此项不确定度可以通过回收率的测定进行评定。 　　表3回收实验检测结果 　　由表3中数据得到的不确定度为：u12= 相对标准不确定度 0.0136。同时，需要对回收率进行显著性检验，以此确定frec是否归入粮食中T-2毒素含量的计算中。 　　2.2.5随机效应引入的不确定度 　　在样品检测过程中，由随机效应产生的不确定度可以通过对同一种样品平行测定结果进行评定得出。 　　3结论 　　测定粮食中T-2毒素的不确定度主要有样品处理过程产生的不确定度，其次是标准溶液、体积以及随机效应引起的不确定度，而样品称量和液相色谱仪产生的不确定度极小，可忽略不计。在实验的样品处理过程中要更加规范以减小T-2毒素在前处理过程中的损失，其次要注意标准溶液的保存，对其进行密封低温保存，同时选用更高精度的量具，增加平行实验的次数，可以进一步减小不确定度。 　　参考文献： 　　[1]刘敏.高效液相色谱法测定食品中的添加剂和非法添加物[D].山东农业大学，2012. 　　[2]赵雪萍.固相萃取―高效液相色谱法检测大豆及豆制品