高中生物选修1专题2课题1微生物的实验室培养.pptVIP

涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。 问题讨论 微生物的恒温培养 微生物的恒温培养 微生物的恒温培养 平板划线法和稀释涂布平板法的比较 优点 缺点 适用范围 平板划线法 可以观察菌落特征，对混合菌进行分离 不能计数 适用于好氧菌 稀释涂布平板法 可以计数，可以观察菌落特征 吸收量较少、较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延 适用于厌氧菌和兼性厌氧菌 (3)菌种保存： 临时保藏法 甘油管藏法 适用 对象 使用的菌种 保存的菌种 培养基类型 固体斜面培养基 液体培养基 温度 方法 菌落长成后于冰箱中保存，每3～6个月将菌种从旧的培养基转移到新鲜培养基上 将培养的菌液与等体积灭菌后的 混合均匀后于冷冻箱内保存 缺点 菌种易被 或 频繁 长期 4 ℃ －20 ℃ 污染 产生变异 甘油 四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。 （三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。 本课题知识小结: * * * * * * * * * ：牛肉膏和称量纸＋水取出称量纸―→加蛋 白胨和氯化钠―→加琼脂(注意：不断用玻璃棒 搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂)―→补加蒸 馏水至100 mL 　　　 灭菌 ? 　　　 ：待培养基冷却至50 ℃左右时，在 附近 倒平板 溶化 干热灭菌 倒平板 酒精灯火焰 倒平板技术 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 (1)方法： ① ：通过接种环在 固体培养基表面 的操作，将聚集的菌种逐步 到培养基的表面。 ② ：将菌液进行一系列的 ，然后将不同 的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 (2)鉴定：将接种后的培养基和一个 的培养基都放入 恒温箱中，培养12 h和24 h后，分别记录观察。 平板划线法 琼脂 连续 划线 稀释分散 稀释涂布平板法 梯度稀释 稀释度 未接种 37 ℃ （二）纯化大肠杆菌 平板划线的操作方法 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 问题讨论 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 第一次灼烧 每次划线前灼烧 划线结束灼烧 目 的 避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 杀死上次划线结束后接种环上残留的微生物，使每次划线的微生物来自上次划线末端