乳品中黄曲霉毒B1,B2,G1,G2,M1的测定.docVIP

固相萃取-高效液相色谱法检测乳品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1摘要：建立测定乳品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1含量的固相萃取-高效液相色谱方法。样品经乙腈提取，ProElut AFT固相萃取柱净化，以正己烷和三氟乙酸衍生后，通过Diamonsil C18(2)色谱柱分离，流动相为水、乙腈和异丙醇，梯度洗脱，流速1 mL/min，荧光检测器检测，激发波长365 nm，发射波长435 nm，外标法定量。结果表明5种黄曲霉毒素在0.01~5 μg/L范围内线性关系良好。样品加标回收率在80%~100%之间，相对标准偏差1.58%~4.21%，方法检出限为牛奶：0.02~0.06 μg/kg，奶粉：0.040.12 μg/kg。 Determination of aflatoxins B1、B2、G1、G2、M1 in dairy products by solid phase extraction - high performance liquid chromatographic(SPE-HPLC) Abstract：To establish the method for determination of aflatoxins B1、B2、G1、G2、M1 in dairy products by solid phase extraction with high performance liquid chromatographic(SPE-HPLC). The samples were extracted with acetonitrile, then purified with ProElut AFT column, derived with hexane and trifluoroacetic acid, and separated on Diamonsil C18(2) column, mobile phase is water、acetonitrile and 2-propanol with a flow rate of 1 mL/min, detected by fluorescence detector, EX: 360nm、Em: 435nm, quantified by external standard method. The result indicated that the calibration curves showed good lineaarities for aflatoxins in the range of 0.01-5 μg/L. The spiked recoveries were in the range of 80%-100% with relative standard deviations of 1.58%-4.21%, the limits of determination were 0.02-0.06 μg/kg in milk and 0.04-0.12 μg/kg in milk powder. 黄曲霉毒素(AFT)是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉和寄生曲霉产生的次生代谢产物，是现在发现的毒性和致癌性最强的天然污染物，其毒性是氰化钾的10倍，砒霜的68倍。黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1是最为常见且最重要的五种衍生物，可存在于土壤、坚果、谷物、食用油、及乳制品中。由于新生儿童免疫系统不完善，抵抗力较弱，所以婴幼儿食品尤其是奶粉、牛奶中黄曲霉毒素的检测尤为重要。 目前，黄曲霉毒素的检测方法有薄层色谱法(TLC)[1]、酶联免疫吸附法(ELISA)[2-3]、高效液相色谱-荧光法(HPLC-FLD)[4-7]；高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)[8-10]。TLC法对人和环境的污染系数大，操作繁琐，灵敏度不高，很难普及。ELISA方法虽然操作简单，但定量不精确，易出现假阳性结果。HPLC-MS法仪器昂贵，检测成本较高，而HPLC-FLD操作简单选择性好灵敏度高定量准确，同时仪器价格适中，适宜推广。另外，乳制品成分复杂、蛋白含量高、含有多种维生素及微量元素，所以样品净化在检测过程中占有重要的地位，目前的净化方法主要采用免疫亲和柱(IAC)净化[11-13]和其它固相萃取柱净化，如石墨化碳黑柱[14]CN柱[15]HLB柱[16]等。IAC虽然选择性好但是价格昂贵、储存条件苛刻、保存期短，其它固相萃取柱净化过程中涉及步骤较多，且净化效果一般。故本文选择ProElut AFT固相萃取柱结合高效液相色谱荧光检测器测定乳品中黄曲霉毒素，方法灵敏度高，步骤简单，净化效果好，成本较低，适合推广。 1 实验部分