质谱分析技术-1102.ppt

* * * * * * MS/MS 质谱 Mass/Charge (M/z) Intensity 3、蛋白质的翻译后修饰分析 Post-translational modifications (PTMs) Phosphorylation Ubiquitination Glycosylation Acetylation Sumoylation Methylation…… 3.1 蛋白质的磷酸化修饰 蛋白激酶将ATP末端的磷酸基团转移到蛋白质侧链的羟基上； 磷酸酶催化蛋白质侧链上磷酸基团的水解。 3.2 磷酸化修饰的氨基酸 EEVAS*EPEEAAS*PTTPK EEVAS*EPEEAASPTTPK EEVASEPEEAASPTTPK y1-y5, M y6-y12, M+80 y13-y17,M+160 y1-y17, M y1-y12, M y13-y17,M+80 IMAC: Immobilized Metal Affinity Chromatography SIMAC: sequential elution from IMAC 3.3 磷酸化蛋白质组（Phosphoproteome） 荧光标记 稳定同位素标记 4、蛋白质的定量分析 ? 2D-DIGE ? ICAT (Isotope-coded affinity Tags) ? iTRAQ (Isobaric tag for relative and absolute quantitation) ? SILAC (Stable Isotope Labeling with Amino Acids in Cell Culture) …… ? Label free 4.1 SILAC (Stable Isotope Labeling with Amino Acids in Cell Culture) Isobaric tag for relative and absolute quantitation. Chemically tag N-terminus of peptides generated from protein digests (Lys and Tyr). Up to 4 (or 8) different labels for different states. Combine all the samples. Fractionate peptides by strong cation exchange chromatography. Tandem MS to fragment labelled peptides that co-elute from each protein. Identify reporter ions and use intensity to quantify levels of peptides/proteins. iTRAQ? by Applied BioSystems 4.2 iTRAQ Labeling 4.2 iTRAQ Labeling + Peptide 14 14 12 12 16 14 14 13 13 16 14 15 13 13 17 15 15 13 13 18 114 115 116 117 iTRAQ定量分析的原理 4.2 iTRAQ Labeling * * * * * 由于质谱方法在测量的准确性和可靠性上所具有的巨大优势，目前很多国际组织或校准品制造商都用质谱法作为参考方法，对一些测定项目的校准品进行定值，如：葡萄糖、尿酸、T4、肌酐等。 * 1、串联质谱应用很广泛，如在食品检测、药物检测等领域；但在临床领域最主要应用于遗传代谢病的检测。 2、上海、杭州市为新生儿免费开展串联质谱遗传代谢病的筛查，说明了政府对于此项目的认同与支持！国外的做法也说明外国政府的认同。 * * 1、此片子的内容起到承上启下的作用 2、此片子的讲解可结合 “遗传代谢病的发病机制”的内容进行 3、由于串联质谱检测代谢物质多，所以能提示的遗传代谢病种并非如传统方法的1种，而是40多种。 * * * 1、采血 2、实验室对标本前处理（1～2小时） 3、串联质谱检测（2min一个标本） 4、得到各指标的值 5、通过分析各指标，判断是否患遗传代谢病 * 串联质谱检测的病种共46项（其中瓜氨酸血症2型在新生儿期难以检出），包括18种氨基酸血症、14种有机酸血症、14种脂肪酸氧化缺陷疾病 * * * * * * * * * * *  遗传代谢病病种 对应的串联质谱检测参数 18种氨基酸代谢症： 　 高苯丙氨酸血症 Phe