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青岛大学 硕士学位论文 IFN--β和angiostatin分别在离体和在体条件下对淋巴管内皮 细胞生成的影响 姓名：阴晓峰 申请学位级别：硕士 专业：人体解剖学与组织胚胎学 指导教师：邵旭建  ????蚢?????分别在离体和在体条件下对淋巴管 目的： ?⑹质跚卸贤们盎蚝笾?馨凸?天后，生理盐水侧?哉兆?的淋巴 ???????对在体淋巴管的愈合有抑制作用。???一?对离体淋  ? ?? ? ?????涸襰 ??猵 ? ????? ????．?瓹??? ????????? ??? ? ????? ??猵 ???篐??????? ? ? ? ????％??????????????? ??? ?? ? ??? ????????? ?? ???????? ???????．?甀?? ???? ??????：???? ??? ??  引 瘤和抑制肿瘤转移的假说。经过?多年的努力，人们通过对肿瘤新生血管的生成研 淋巴管。对此现象，???等学者认为这是由于不断分化增殖的肿瘤细胞产生的机械 压力和持续较高的瘤内组织间压使瘤内淋巴管塌陷所致。尽管以前的研究认为肿瘤 内淋巴管缺失是一种常见现象，但可以观察到肿瘤周围组织中有扩大的淋巴管并经 常穿入肿瘤边缘区。随着新的特异性淋巴管标记物的发现，赵令辉等的研究资料已 经证实，在大肠癌等数种癌组织中确有淋巴管存在。 研究。这些血管生成抑制因子能否抑制淋巴管的生成，目前这方面的研究仅见谢方 鉴于淋巴管生成在肿瘤生长和转移中的重要作用，淋巴管生成抑制剂的开发和 应用将有助于抑制肿瘤局部淋巴管的生成，阻断肿瘤的淋巴管转移途径，减少病情 恶化的机会，延长大多数肿瘤患者的生存时间，改善患者的生存质量。本研究旨在 找到安全、有效、经济、实用的淋巴管抑制剂，为临床开发治疗癌症的新型药物提 供有益的资料。  ??实验材料 ?超净工作台?怪钡ハ蛄餍? 二氧化碳恒温细胞培养箱 隔水式电热恒温干燥箱 苏州市洁净技术研究所 上海安亭科学仪器厂 重庆光电仪器有限公司 绍兴市卫星医疗设备制造有限公司 浙江台州环球空气压缩机制造厂 上海跃进医疗器械厂 圆筒式过滤器 青岛海尔股份有限公司 上海奥豪斯公司 ??????电子天平 江苏金坛荣华仪器制造有限公司 浙江恒丰仪器厂 ??狢水浴恒温振荡器 ?? 上海精密科学仪器有限公司 超薄切片机???? ? 日本电子公司 ????净騂???公司 上海生工生物工程有限公司 上海惠兴生化试剂有限公司  青岛大学硕士学位论文 ?????公司 ????抗体试剂盒 北京中山生物科技有限公司 ???， ???????加双蒸水至???，高压 ??．?，??????，???甇?琋???．??琋?篐????????，酚红??? ??．???????溶液 ℃保存备用。 一包??培养基加双蒸水至???；用???调?值至??，过滤灭菌，分装备 ??一谷氨酰胺溶液????／? ??? ??％明胶溶液 ???????芙獾????羲?校??嗣鹁?肿埃?℃保存 ??芙獾??????缓冲液中，过滤灭菌，分装备用， 链霉素?，青霉素??騏加入到???蘧??硌嗡?校?玫??倍浓度的原液， 取??亩嗑劾蛋彼崛芙庥???乃?羲?校??嗣鹁???保存备用。 ??校??嗣鹁??℃保存备用。  ??培养液 ??试验方法 心管，注入适量的离心液，并大力冲洗，而后用刀片刮下已松动的内皮细胞，再用  青岛大学硕士学位论文 将培养的原代细胞，每隔??天更换一次培养液。约??周后，内皮细胞彼 ?痬???下孵育?????冲洗后加辣根酶标记链霉卵 ? 白素?℃下孵育?????冲洗后加??芤海??嫦路跤齦??，荧光显微镜下 观察。 ??．?? 甲醛，??逑?次，每次??，用镊子夹取盖玻片，使细胞面向上置于事先准备 ???一??ǘ任? ?痬??于另一玻璃皿中，镊子夹取盖玻片使细胞面向下覆 ? ?  透射电镜观察：细胞生长融合成单层后，加入冷丙酮固定并将消化下来的细胞 用含?％胎牛血清的??培养液悬浮并调整细胞浓度为?????／?，以每孔 首先制备细胞悬液并接种到预先放有盖玻片的?孔培养板中，每孔???，置 于??、???汉??サ目掌?跫?屡嘌??后弃上清液。然后分别加入含有 ???／?的????每孔?????枇⒍哉兆椋?绦?嘌??。吸尽上清液，加 后每孔加???的???????痬?置于?℃、???和?％的空气条件下染色 ????馄?谟ü庀晕⒕迪鹿鄄欤?し⒐獠ǔの???。  青岛大学硕士学位论文 ?活体抑制试验 分离出淋巴管，截断淋巴管?舻舫ぴ?．??牧馨凸?。  第二章结果 ??淋巴管内皮细胞的形态学观察 ?掌?、?。 在透射电镜下可观察到，内皮细胞呈卵圆形