第二章 聚糖的化学-110919课件.ppt

降血糖活性分析： 四氧嘧啶腹腔注射→高血糖模型，连续灌胃茶多糖12d，对比茶多糖的降血糖活性。 降血糖活性顺序为： TPSⅠ TPSⅢ TPSⅡ 酶提茶多糖较水提茶多糖降血糖效果明显; 水溶性多糖(TPSⅠ)降血糖活性最好； 复合纤维素酶提取可提高其得率,增强其活性。 高级生物化学 得率分析： TPSⅠ得率最低； 复合纤维素酶提取多糖得率、糖醛酸得率比热水提取得率高1.53倍和1.42倍。 高级生物化学 1.11 举例2： 不同酶法提取工艺对茶多糖组成的影响 简介： 采用果胶酶、胰蛋白酶及复合酶等3 种酶法提取和不加酶水浸提法为对照，提取崂山粗老绿茶中的茶多糖（TPS）。 结果表明，复合酶提取法的提取率最高，达到5.17±0.17%。 高级生物化学 结果表明： 4 种工艺对提取的TPS 的单糖组成种类影响不大，但对各单糖组分之间的比例稍有影响。 4 种工艺获得的TPS 的总糖含量由高到低依次为果胶酶法、复合酶法、胰蛋白酶法以及不加酶水浸提法，其中果胶酶法获得的TPS 总糖含量高达95.26±4.09%， 但其糖醛酸含量比其他3 种工艺显著降低。 4 种工艺对提取的TPS 的氨基酸组成种类影响亦不大，但对各氨基酸的含量有较大的影响。 果胶酶法、胰蛋白酶法提取的TPS 各氨基酸含量与不加酶水浸提法的相比减少很多。 高级生物化学 End * κ-kappe； ι-iota； ν-nu * （蛋白聚糖混合物） （FGF受体） （细胞外侧） （细胞质） （硫酸肝素） [多配体(蛋白)聚糖] FGF:成纤维细胞生长因子 高级生物化学 连接方式和多样性 （N-乙酰半乳糖胺） （N-乙酰葡萄糖胺） 高级生物化学 (Asn) (Thr) 膜蛋白中的糖 （磷脂） （膜内在蛋白） （糖脂） （寡糖） （膜内在蛋白） （胆固醇） （疏水α螺旋） 高级生物化学 膜蛋白分子中的糖 （低聚糖） （胞内） （脂双层） （胞外） 高级生物化学 糖蛋白分子中的多糖 高级生物化学 （透明质酸） （N-链接低聚糖） （O-链接低聚糖） 核心蛋白 糖蛋白分子中的多糖 （硫酸角质素） （硫酸软骨素） 高级生物化学 1.5 多糖的分离纯化 多糖是极性大分子化合物，多易溶于水，不溶于乙醇。 常用水、稀碱溶液抽提，氯化钠梯度洗脱。 超声处理可加速多糖释放 注意：在较强的碱性溶液中多糖可被水解 高级生物化学 ① 动物多糖的提取 动物多糖特点： 显酸性，存在结缔组织中，多与蛋白质结合 常用三种分离方法： ? 碱溶液提取法； ? 中性盐溶液提取法； ? 蛋白酶消化法。 蛋白酶消化法为最佳，降解少，产量高。 例如：鹿茸中酸性多糖的提取——木瓜酶消化 鹿茸渣+木瓜酶+酶活化剂→60℃水浴消化24h →上清液(沉淀可反复处理)→加醇将多糖沉淀析出 高级生物化学 ②植物多糖的提取 植物根、茎、叶、花、果、种子中存在大量多糖。 植物多糖多不溶于冷水，在热水中呈粘液状，遇乙醇沉淀被分离。 单一植物多糖的分离提取极为困难。 对含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子等，应先脱脂，再水提。 对含色素较高的样品，需先脱色处理。 高级生物化学 ★分离植物单一多糖的一般流程 用水或甲醇等有机溶剂浸泡（浸提）； 低温减压（浓缩）； 流水透析（除小分子）； 凝胶柱层析（分离纯化）； 冷冻干燥(得较单一多糖)； 高效液相色谱或凝胶层析（测定其纯度、分子量）； 酸解→气-液相层析或纸层析（测定其单糖组成） 如人参多糖(panaxans)，苍术多糖(atractans)， 乌头多糖(aconitans)，栝萎根多糖(trichosans)， 紫草多糖(lithospermans)等提取均可用上列方法。 高级生物化学 ③ 菌类多糖的提取 除去小分子杂质——透析法(用不同型号透析膜)。 除去游离蛋白质——由Sevag法，三氟三氯乙烷法和三氯醋酸法。三者均为沉出法。 注：前两种方法常用于微生物，后者多用于植物。它们均不适于糖蛋白，因为，可将糖同时沉除。 糖蛋白质中蛋白质的去除：蛋白酶破坏蛋白质与糖的结合，再除蛋白质。 高级生物化学 a. Sevage 法： 依据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性的特点： 样品中加入：氯仿:戊醇(或正丁醇)5:1 (或4:1)→混合物剧烈振摇20～30min（蛋白质与混合物生成变性凝胶状而被分离）→离心→ 除去变性蛋白质（水层和溶剂层分界处） 优点： 抑制降解，如配合蛋白质水解酶效果更佳。 高级生物化学 ★胰蛋白酶-Sevage法联用脱除柿多糖蛋白 由正交实验找出酶法脱蛋白的最优条件，比较酶法、Sevage法、酶-Sevage联用法的脱蛋白效果和多糖保存率。实验工艺： 胰酶液(