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欢迎各位评委老师 莅临指导！ 决明子多糖氯仿-正丁醇法脱蛋白 答 辩 人：胡学文 指导老师：乔德亮 * * * 2013届学士学位论文答辩 论文的主要内容 第一部分 第二部分 第三部分 前言 实验方法 实验结果 第一部分 前言 一、决明子概况 决明子（Semen Cassiae）是豆科植物决明或小决明的成熟干燥种子。决明子具有较好的降血脂，降血压，抗氧化，抗衰老等疗效。决明子内含有多种成分，主要含蒽醌类、萘骈-吡咯酮类、脂肪酸类、氨基酸和无机元素。决明子中含有胱氨酸、γ-羟基精氨酸、组氨酸、半乳糖配甘露聚糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、棉子糖以及胱氨酸、天门冬氨酸、γ-羟基精氨酸等。目前对决明子的成分研究主要集中在蒽醌类，由于多糖是决明子中具有医疗保健作用的主要成分之一，所以目前对多糖的研究具有很高的价值。 二、课题的研究目的及意义 决明子中多糖成分具有很好的抗氧化作用，延缓衰老。所以对决明子中多糖的提取具有一定的意义。多糖的提取方法比较多，但是在多糖的提取过程中会伴随蛋白质的产生，所以除去蛋白质是多糖提取纯化的一个关键步骤，因此有必要对决明子的多糖脱蛋白方法进行研究。本论文研究的目的是找到最合适的脱蛋白方案。 第二部分 实验方法 一、多糖、蛋白质含量的测定 1、决明子多糖含量测定 决明子多糖测定采用苯酚-硫酸法[8]，取多糖溶液0.1ml稀释至1.0ml,加6%苯酚溶液0.5ml,浓硫酸2.5ml,混匀，冷却，测490nm波长吸光值。 2、蛋白质含量测定 取决明子多糖溶液，使用石英比色皿，用蒸馏水作为对照，在280nm波长处，测蛋白质的吸光度。 二、脱蛋白效果的评价 多糖损失率=（脱蛋白前多糖含量-脱蛋白后多糖含量）/ 脱蛋白前多糖含量×100% 蛋白质去除率采用280nm吸光值比较法，将脱蛋白前的蛋白质吸光值和脱蛋白后的蛋白质吸光度进行比较，得出蛋白质去除率。 三、单因素实验 1、单因素实验一 ——正丁醇-氯仿比例对脱蛋白的影响 正丁醇-氯仿混合液用量为30%，脱蛋白次数为6次，脱蛋白时间为40min，正丁醇-氯仿比例设置为15%、20%、25%、30%、35%五个梯度，实验重复两次，取平均值，得出该因素对脱蛋白的影响。 2、单因素实验二 ——正丁醇-氯仿混合液用量对脱蛋白的影响 正丁醇-氯仿比例为25%，脱蛋白次数为6次，脱蛋白时间为40min，正丁醇-氯仿混合液用量设置为15%、20%、25%、30%、35%五个梯度，实验重复两次，取平均值，得出该因素对脱蛋白的影响。 3、单因素实验三 ——脱蛋白次数对脱蛋白的影响 正丁醇-氯仿比例为25%，正丁醇-氯仿混合液用量为30%，脱蛋白时间为40min，脱蛋白次数设置为3、4、5、6、7、8六个梯度，实验重复两次，取平均值，得出该因素对脱蛋白的影响。 4、单因素实验四 ——脱蛋白时间对脱蛋白的影响 正丁醇-氯仿比例为25%，正丁醇-氯仿混合液用量为30%，脱蛋白次数为6次，脱蛋白时间设置为10、20、30、40、50mim五个梯度，实验重复两次，取平均值，得出该因素对脱蛋白的影响。 四、正交实验 正交实验因素水平表 20 30 40 5 6 7 20% 25% 30% 20% 25% 30% 1 2 3 D时间(min) C次数 B用量(v/v) A比例(v/v) 因素 水平 第三部分 实验结果 一、单因素实验 1、单因素实验一 ——正丁醇-氯仿比例对脱蛋白的影响 结论：15%比例梯度为最佳梯度，多糖损失率为27.3%,蛋白质去除率为40.9% 2、单因素实验二 ——正丁醇-氯仿混合液用量对脱蛋白的影响 结论：正丁醇-氯仿混合液用量为15%时为最佳梯度，蛋白质去除率高达34.4% 3、单因素实验三 ——脱蛋白次数对脱蛋白的影响 结论：6次为最佳脱蛋白次数。