微生物综合性.doc

综合性（设计性）实验 实验报告 实验名称： 环境因素对微生物生长的影响 姓　名： 李春辉 学 号： 2012041106 指导教师： 毛 宁 专　　业： 生物科学 实验班级： 12级生物科学1班 实验时间： 2014年 11月 实验地点： 微生物学实验室 成　 绩： 环境因素对微生物生长的影响 一、实验目的 1、了解渗透压及生物因素（抗生素）对微生物生长的影响。 2、了解抗生素对微生物生长的影响，学习抗菌谱实验的基本方法。 3、进一步掌握培养基的制备及划线操作。 二、实验原理 微生物的生长繁殖受外界环境因素的影响，环境条件适宜时微生物生长良好，环境条件不适宜时微生物生长受到抑制，甚至导致微生物死亡。物理、化学、生物及营养等不同环境因素影响微生物生长繁殖的机制不尽相同，而不同类型微生物对同一环境因素的适应能力也有差别。 1、渗透压 微生物在等渗溶液中可正常生长繁殖；在高渗溶液中细胞失水，生长受到抑制；在低渗溶液中细胞失水膨胀，因为大多数微生物具有坚硬的细胞壁，细胞一般不会裂解，可以正常生长，但低渗溶液中溶质含量低，在某些情况下也会影响微生物的生长。另一方面，不同类型微生物对渗透压变化的适应能力不尽相同，大多数微生物在0.5%~3%NaCl浓度条件下生长受到抑制，但某些极端嗜盐菌可在30%以上NaCl浓度条件下正常生长。 2、生物因素（抗生素） 在自然界中普遍存在微生物间的拮抗现象，许多微生物可以产生抗生素，能选择性地抑制或杀死其他微生物。不同抗生素的抗菌谱是不同的。了解某种抗生素的抗菌谱在临床治疗上有重要的意义，利用滤纸条法可初步测定抗生素的抗菌谱。当滤纸条上的抗生素溶液在琼脂平板上想四周扩散后可形成抗生素浓度由高到低的梯度，将不同实验菌与滤纸条垂直划线接种、培养后，根据抑菌带的长短可判断改抗生素对不同实验菌生长的影响的程度，初步确定其抗菌谱。 三、实验器材及实试剂 1、菌种 金黄色葡萄球菌、土壤分离细菌B1，B2。 2、试剂 10g/L AgNO3溶液，40%石炭酸 ，2%甲酚皂，青霉素，链霉素（80万单位/mL） 3.仪器和其他用品 酒精灯、接种环、镊子、培养皿、无菌吸管、试管、三角瓶、无菌滤纸条。 培养基 斜面培养物，菌悬液，牛肉膏蛋白胨平板培养基（NaCl含量 0.1% ， 0.5% ， 15%） 四、实验方法及步骤 1.渗透压对微生物生长的影响 （1）倒平板 将含有0.1%，0.5%，15%的NaCl的营养琼脂熔化后分别倒平板。 标记 各取一套上述培养基，分别用记号笔在皿底划分为3个区域，标记上金黄色葡萄球菌、土壤分离细菌B1，B2。 接种 无菌操作用接种环分别取上述三种菌，在平板相应的位置划线接种。 （4）培养、观察 将上述平板倒置于30℃保温2-4 d,观察细菌生长状况并记录。 生物因素（抗生素）对微生物生长的影响 倒平板 将含有NaCl0.5%牛肉膏蛋白胨琼脂培养基熔化后倒平板，注意平皿中培养基厚度均匀。 贴滤纸条 无菌操作，用镊子取无菌滤纸条分别浸入链霉素溶液润湿，在容器壁沥去多余溶液，再将滤纸条贴在平板上。 接种 无菌操作，用接种环分别取三种菌，从滤纸条边缘分别垂直向外划线接种。 培养、观察 将上述平板倒置于37 ℃保温24h,观察细菌生长状况并记录。 化学试剂对微生物生长的影响 菌液的制备 无菌操作将金黄色葡萄球菌接种至装有5mL 牛肉膏蛋白胨液体培养基的试管中，37℃培养18h. 倒平板 将含有NaCl0.5%牛肉膏蛋白胨琼脂培养基熔化后倒平板，注意平皿中培养基厚度均匀。 涂平板 无菌操作吸取0.1mL金黄色葡萄球菌菌液加入上述平板，用无菌三角涂棒涂布均匀。 标记 将上述平板皿底用记号笔分成4等分，分别标明一种化学试剂名称。 贴滤纸片 无菌操作，用镊子取无菌滤纸片分别浸入 10g/L AgNO3溶液，40%石炭酸 ，2%甲酚皂，青霉素中润湿，在容器壁沥去多余溶液，再将滤纸片分别平贴在平板相应的位置，在平板中央贴上浸有无菌生理盐水的滤纸片作为对照。 培养、观察 将上述平板倒置于37 ℃保温24h,观察并记录抑菌圈的大小。 实验结果及分析 表1.渗透压对微生物生长的影响 NaCl质量的浓度/% 0.1 0.5 15 金黄色葡萄球菌 ++ + + 土壤分离菌B1 +++ +++ + 土壤分离菌B2 - - - 表2.化学试剂对微生物生长的影响 试剂 抑菌圈直径/mm 青霉素 38 2%甲酚皂 36