实验一、乳酪蛋白的制备及部分性质检测课件.pptVIP

* * 动物生物化学实验 （共21学时） 指导老师: 刘建昌 池雪林 1、系统练习和掌握生物化学的基本实验技能； 一、实验教学的目标和要求 4、培养理论联系实际的学风和动手能力。 2、熟悉常用生化仪器的原理和使用方法； 分光光度计、离心机、电泳仪等 3、了解有关电泳、离心、层析、光谱分析、制 备、透析等基本的生化实验手段； 二、实验室的规则 1、实验前必须认真预习实验内容，明确本次实验的目的和要求，掌握实验的原理。 2、实验过程要听从教师的指导，认真按照实验步骤和操作规程进行实验。 3、如实进行实验记录，实验完毕及时整理数据，按时上交实验报告。 4、使用各类的仪器应严格遵守操作规程。 5、实验完毕必须及时清洗并放好各种的玻璃仪器，做好值日生。 三、实验室的管理 正确清洗玻璃器皿 各组玻璃仪器的管理 每次实验认真清点保管好玻璃器皿 损坏丢失赔偿 问题 1、用规范的实验报告纸书写； 四、实验报告书写要求 5、 真实准确描述实验结果，并对结果进行分析 2、报告包括实验目的、实验原理、试剂与器材、实验步骤、实验结果和结果分析； 3、简明扼要的概括实验原理和实验步骤； 4、列出主要的试剂与器材； 包括分析结果与预期实验现象差异的原因、注意事项、实验课改进的意见等。 学时分配表 6 聚丙烯酰胺凝胶柱状电泳分离血清蛋白 实验六 3 动物组织染色体DNA的制备 实验五 3 血浆IgG的分离制备 实验四 3 唾液淀粉酶活性的观察 实验三 3 蛋白质含量的测定 实验二 3 乳酪蛋白的制备及部分性质检测 实验一 总学时 实验、实习内容 章 次 实验一 乳酪蛋白的制备及部分性质检测 1、学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。掌握蛋白质等电点沉淀蛋白质的原理和方法。 二、实验目的 一、实验内容 2、对酪蛋白、乳清蛋白的部分性质进行检测。 1、采用等电点沉淀、低速离心等方法从牛乳中制备酪蛋白粗品; 2、通过鉴定加深对蛋白质理化性质的认识。 三、原理 乳的营养成分 蛋白质 乳脂 乳糖 矿物质 蛋白质 酪蛋白 乳清蛋白 牛乳中主要的蛋白质为酪蛋白，人乳中的蛋白质主要是白蛋白。 乳蛋白的分离纯化是研究其组成、结构、性质和生物学功能的基础。 根据这个原理，将牛乳的pH调整到4.6，即酪蛋白的等电点时，酪蛋白便会沉淀出来。 牛乳中主要的蛋白质为酪蛋白，约占总蛋白量的80%。 蛋白质是两性电解质。蛋白质在等电点时，溶解度最小，容易沉淀析出。 用乙醇除去酪蛋白沉淀中不溶于水的脂肪，便可得到纯度较高的酪蛋白。所得酪蛋白供定性鉴定。 1、醋酸钠缓冲液（0.2mol/L，pH4.6） 2、 95%（v/v）乙醇 3、 乙醚 4、 0.1mol/LNaOH 5、 0.2% HCl 6、 5 %醋酸铅 7、 pH试纸（或pH计） 8、 表面皿，电炉，离心机，水浴锅, 循环水真空泵。 四、试剂及器材 1、酪蛋白等电点沉淀 （一）酪蛋白的制备 取新鲜牛乳50mL,放入250mL烧杯中加热至40℃。加入50mL加热至同样温度的醋酸钠缓冲液，一边加一边摇动，调整混合液的pH为4.6。冷却至室温，继续放置5min，然后离心15分钟，上清液为乳清（保留）。过滤所得沉淀即酪蛋白。 五、实验步骤 2、除脂类杂质 将上述沉淀物转入烧杯中，加约30mL乙醇混匀，用布氏漏斗抽滤。该沉淀继续用乙醇和乙醚等量混合液（ 30mL ）洗涤1次，抽干。取出粉状物，摊开在表面皿上，使乙醚完全挥发。 （二）酪蛋白的性质鉴定 2、含硫（胱氨酸和蛋氨酸）测定 取少量酪蛋白溶于1mL 0.1mol/L NaOH溶液中，再加入1~3滴醋酸铅，加热煮沸，观察溶液的颜色。 1、溶解度 取试管4支，分别加入蒸馏水、0.2% 盐酸、0.1mol/L氢氧化钠、2mol/L尿素溶液各2mL。于每管中加入少量酪蛋白。不断摇荡，观察并记录各管中的酪蛋白溶解性。 （三）乳清中可凝固蛋白质的鉴定 将制备酪蛋白时所得滤液移入烧杯中，徐徐加热。即出现蛋白质沉淀。此为乳清中的球蛋白和清蛋白。