液相色谱2分配离子交换凝胶.pptVIP

第二节 分配色谱 一、基本原理 1、吸附色谱的局限性 （1）吸附色谱不适合于分离强极性的亲水性物质（成分）； （2）吸附剂的含水量对吸附剂的吸附能力影响较大，常使结果重现性较差； （3）易出现拖尾峰。 2、分配色谱原理 （1）固定相为液体 将某种溶剂涂布在吸附剂颗粒表面或纸纤维上，形成一层液膜，称为固定相。 吸附剂颗粒表面或纸纤维叫载体或担体。 根据组分在两相中的溶解度不同而分离。 （2）“相似相溶”原则 极性物质在极性溶剂中溶解度大，K大； 非极性物质在非极性溶剂中溶解度大，K大。 （3）分配定律与分配等温线 （4）分配色谱的特点： a、重现性 b、峰对称 c、无强烈滞留现象. 几乎适用于各种类型的化合物，特别适宜于亲水性物质，如极性较大的生物碱、苷类、有机酸、糖类及氨基酸的衍生物等。 二、载体 只起负载固定相的作用。 要求：惰性、无吸附能力、纯净、颗粒均匀。 种类 1）硅胶：重现性差 2）硅藻土：应用最多 3）纤维素：纸色谱 三、固定相和流动相的选择 正相分配色谱：固定相的极性大于流动相的极性； 固定相：水、缓冲溶液、稀硫酸、甲醇、丙二醇等；按一定的比例与载体混匀后填装于色谱柱。 流动相：石油醚等 洗脱顺序:极性大的组分保留作用强；极性小的组分保留作用弱 反相分配色谱：固定相的极性小于流动相的极性。 固定液：硅油、液体石蜡等极性较小的有机溶剂。 流动相：水、各种水溶液（酸、碱、盐及缓冲液）、与水混合的有机溶剂。 洗脱顺序:极性小的组分保留作用强；极性大的组分保留作用弱 四、分配色谱操作注意事项 1、两相溶剂的处理 2、上样量与样品前处理。 3、柱色谱 4、纸色谱 第三节 离子交换色谱法(ion exchange chromatography) 一、基本原理 1、离子交换剂与离子交换过程 （1）离子交换剂 为一种固体状可在水溶液中浸润和溶胀的多孔颗粒，其表面有许多可电离的基团，在水中电离时，有一种离子可在水中自由移动，而另一种则在固定相上不能自由移动。 可自由移动的离子可以被其它同类离子置换，即离子交换。 （2）离子交换过程 水溶液中（流动相中）的各种离子，可与离子交换树脂上固定的离子基团结合，使原来与其结合的离子被置换，进入流动相而发生置换。 2、分离机理 （1）不同的离子与交换树脂的结合力不同，从而固定相对它的保留能力不同，从而造成差速迁移。 （2）离子交换平衡： 二、离子交换树脂 1、离子交换树脂的构成 由苯乙稀和二乙烯基苯聚合而成的网状结构，不溶于水和有机溶剂，性质稳定。 2、离子交换树脂的类型 （1）阳离子交换树脂 — 可交换的离子为阳离子。 氢型、钠型 强酸型、弱酸型、中强酸型（－COOH、－PO3H、－SH） 例如：磺酸型 R-SO3－H+ (pH范围宽) ** 应注意pH范围，否则交换容量急剧下降。 （2）阴离子交换树脂 — 可交换的离子为阴离子。 按不同碱性分： 强碱型（季胺基团）—NR3+ (pH11) －NH2, －NHR,－NR2等 (pH8) 按可交换的离子分：氢氧型、氯型 3、离子交换树脂的特性 ① 交联度：表示交联剂在离子交换树脂中所占的百分含量，通常使用4～12%的树脂。 交联度大：树脂孔小，刚性强，孔穴多，离子基团多，溶胀小。 适合于体积较小的无机离子的分离 交联度小：树脂孔大，刚性差，渗透性好。 适合于体积较大的有机离子的分离 ② 溶胀：树脂内极性基团吸水性极强，大量的水进入树脂内部，产生膨胀，叫溶胀。 溶胀程度与树脂类型、交联度有关。 因此，严禁干法装柱。 ③ 交换容量：每克干树脂中真正参加交换反应的基团数。 常用单位：mmol/g,mmol/ml等 影响因素：pH、交联度、溶胀特性、分离对象，只能以实际测量为准。 ④ 粒度：离子交换树脂颗粒的大小（指溶胀状态） 三、经验规则（亲和力大小规则） 对小离子亲合力大 水合离子半径越小，亲合力越大 对电荷多的离子亲合力大 A4+ B3+ C2+ D+ 大分子量的有机离子,有较高的亲和力 四、流动相 1、组成：一般为盐类的缓冲水溶液（有一定的pH值）。 2、对分离的影响 ③ 离子强度的影响(盐类浓度) 离子强度↑，溶剂强度↑，洗脱能力↑。 ④ 平衡离子(即流动相中的盐类)的影响 它的种类可影响分离的选择性，浓度影响溶剂强度；它们与树脂的亲合力不同，从而影响组分的相对保留值： a. 离子浓度相同时，高电荷离子与交换基团亲合力大 b. 同价离子，原子量增大亲和力增加 c. 水合离子半径越小，亲和力越大。 3、流动相的选择（淋洗液） ① 用去离子水溶解淋洗剂配制而成 淋洗剂