植物组织培养第四章胚胎培养和离体授粉课件.ppt

三、再生植株的染色体倍数 1、稳定型 继代培养后染色体无变化，植株三倍体 2、畸变型 细胞染色体异常，植株为多倍体，且不一致，形成多种倍性细胞组成的嵌合体。 四、胚乳培养的应用 培养胚乳的首要目的是为了直接获得三倍体植株。 三倍体——六倍体——生产 倍性多样性——筛选非整倍体植株 杂种胚乳—附加系和换代系—遗传育种 第三节 胚珠和子房培养 一、胚珠培养 将胚珠从母株中分离出来，放在无菌的人工环境条件下，让其进一步生长发育，以致形成幼苗的过程。 根据胚珠是否受精分为两类： 受精胚珠的培养 未受精胚珠的培养 （一）胚珠培养的过程 1、胚珠的获取 ⑴培养受精胚珠，摘取授粉时间合适的子房，如培养未受精胚珠，则在授粉前摘取子房。 ⑵表面灭菌 ⑶剖开子房壁，取出胚珠或带胚珠的胎座接种。 2、培养条件 固体培养基，White，Nitsch（普遍使用），MS培养基。附加天然有机物和氨基酸。 蔗糖浓度：幼嫩胚珠4-10%，胚珠内含有合子和少数胚乳核5-6%，刚受精的胚珠8% 室温26℃，50-60%相对湿度，光照18h， 3、受精胚珠的发育 胚珠——种子 胚珠——愈伤组织 二、子房培养 将子房从母株上摘下，放在无菌的人工环境条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。 根据培养的子房是否授粉分为： 授粉子房培养 未授粉子房培养 （一）子房培养的过程 1、子房的获取 未授粉子房在开花前1-5天摘取子房，授粉子房在授粉后摘取子房。 灭菌：禾谷类幼穗表面用70%酒精擦拭即可，双子叶花蕾漂白粉液灭菌，其他植株暴露的子房须严格消毒，无菌滤纸吸干。 拨开幼花，子房接种到培养基上。 2、子房的培养 固体和液体培养基均可，26℃，50-60%相对湿度，光照16h。 N6，MS，BN，Nitsch培养基 （二）培养子房的发育 子房性细胞——愈伤组织或胚状体——单倍体植株 子房体细胞——愈伤组织或胚状体——二倍体植株 三、胚珠和子房培养的应用 1、胚珠 受精胚珠培养目的——打破种子的休眠 挽救胚的发育以获得杂交种 未受精胚珠培养目的——获得单倍体细胞发育而来 的植株 2、子房 授粉子房培养目的——挽救子房内杂种胚的发育 未授粉子房培养目的——获得单倍体植株 试管受精解决杂交育种中不 亲和问题。 第四节 植物离体授粉 在远缘杂交中，遇到两种障碍（受精前和受精后） 离体授粉（离体/试管受精）：将未授粉的胚珠或子房从母体上分离下来，进行无菌培养，并以一定的方式授以无菌花粉，使之在试管内实现受精的技术。 三种方式： 离体柱头授粉（授于离体雌蕊的位置） 离体子房授粉 离体胚珠授粉 一般都在试管内完成的。 一、离体授粉的类型 （一）离体柱头授粉 1、定义：通过雌蕊的离体培养，使无菌花粉授于柱头上，得到含有可育的种子和果实的技术。 2、方法:在花药尚未开裂时切取母本花蕾，消毒后，在无菌条件下用镊子剥去花瓣和雄蕊，保留萼片，将整个雌蕊接种在培养基上，当天或第二天在其柱头上授以无菌的父本花粉。 （二）离体子房授粉 1、定义：通过人工方法将花粉直接引入子房，使花粉粒在子房腔内萌发，并进行正常受精，最后获得具有生活力的种子。又称子房内授粉。 2、两种形式：活体子房内授粉/离体子房内授粉 1）活体子房内授粉：指被授粉的子房并不离体，仍然活在植株上，对其用花粉悬浮液进行授粉，使活体子房发育并形成成熟种子的过程。 ①步骤：确定供试植物的开花和花药开裂时间； 对母本花蕾去雄并套袋； 采集父本花粉； 将花粉引入子房。 ②花粉粒引入子房有两种方法：直接引入法和注射法 直接引入法：用锋利刀片在子房壁或子房顶端上开一切口，把花粉从切口处送进子房。 注射法：用100mg/L硼酸将花粉粒配制成悬浮液，每滴含100-300个花粉粒。母本开花后，将子房用酒精棉表面消毒，在子房两侧彼此对应的位置上钻两个小孔，用注射器由一个小孔向子房注射悬浮液，注满子房腔，到另一小孔流出为止，用凡士林封闭小孔。 2）离体子房内授粉：指用无菌花粉对离体培养的子房进行授