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第二十章 细胞生长调节因子与组织制剂 第一节 细胞生长调节因子的概述 一、细胞生长调节因子的概念 细胞生长调节因子系在体内和体外对效应细胞的生长、增殖和分化起调控作用的一类物质。 细胞生长因子常称为生长因子，实际上应包括负性细胞生长因子，即细胞生长抑制因子，因此以细胞生长调节因子来表达广义的细胞生长因子。 二、细胞因子的共同特性 共同的特征 ： 1、绝大多数细胞因子是低分子量（15～30kD）的蛋白或糖蛋白。 2、细胞因子可以旁分泌、自分泌或内分泌的方式发挥作用。 3、一种细胞可产生多种细胞因子，不同类型的细胞也可产生一种或几种相同的细胞因子 三 细胞因子的分类和生物学活性 细胞因子的种类 细胞因子可被分为白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、生长因子和趋化性细胞因子六类。 白细胞介素（IL）最初是指由白细胞产生又在白细胞间发挥作用的细胞因子，后来发现白细胞介素可由其他细胞产生，也可作用于其他细胞。 干扰素（IFN）是最先发现的细胞因子，因其具有干扰病毒感染和复制的能力故称干扰素。根据来源和理化性质，可将干扰素分为α、β和γ三种类型。IFN-α／β主要由白细胞、成纤维细胞和病毒感染的组织细胞产生，也称为Ⅰ型干扰素。IFN-γ主要由活化T细胞和NK细胞产生，也称为Ⅱ型干扰素。 肿瘤坏死因子（TNF）一种能使肿瘤发生出血坏死的物质。肿瘤坏死因子分为TNF-α和TNF-β两种，前者主要由活化的单核-巨噬细胞产生，抗原刺激的T细胞、活化的NK细胞和肥大细胞也分泌TNF-α。TNF- β主要由活化的T细胞产生，又称淋巴毒素。 集落刺激因子（CSF）是指能够刺激多能造血干细胞和不同发育分化阶段的造血干细胞进行增殖分化，并在半固体培养基中形成相应细胞集落的细胞因子。 生长因子（GF）是具有刺激细胞生长作用的细胞因子。多种未以生长因子命名的细胞因子也具有刺激细胞生长的作用，从这个意义上讲，它们也是生长因子，如IL-2是T细胞的生长因子，TNF是成纤维细胞的生长因子。有些生长因子在一定条件下也可表现对免疫应答的抑制活性，如TGFβ可抑制细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的成熟及巨噬细胞的激活。 趋化性细胞因子是一个蛋白质家族，由十余种结构有较大同源性、分子量多为8～10kD的蛋白组成。 趋化性细胞因子主要由白细胞与造血微环境中的基质细胞分泌，可结合在内皮细胞的表面，具有对中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞的趋化和激活活性。 淋巴细胞趋化蛋白，对淋巴细胞有趋化作用 。 二、细胞生长调节因子的一般制备方法与活性测定 （－）一般制备方法 细胞生长调节因子以提取方法制备得量很低，主要是通过组织培养获得。 动物细胞培养 1、基本概念 体外培养就是将活的生物体结构成分或者活的微小个体放到体外环境中让共生存和生长的技术。 部分培养所培养的生物成分无外乎有两种结构形式，其一是小块组织或称为组织块，其二是将生物组织分散后制成的单个细胞。 体外培养分为原代培养和继代培养两大类。 体外培养可分为植块培养法和分离（散）细胞培养法两大类方法。前者就是将植块直接进行培养，使之在体外条件下存活和生长；而后者就是将细胞悬液用于培养，使分散的细胞在体外条件下存活和生长。 体外培养的结果无外乎有两种，一是维持生存，一是发生显著增长。 动物细胞的结构较原核细胞复杂得多，而且已不是靠一个细胞包办一切生理活动，各种细胞都有明确的分工。为了适应其功能的需要，细胞的形态也有了相应的变化，我们称这种变化为分化（或称特化）。我们通常将离体培养的细胞分为两类：贴壁依赖型和贴壁非依赖型，前者可简称为贴壁细胞，后者可简称为悬浮细胞。 2）生理特点 ① 细胞的分裂周期长 ② 细胞生长需贴附于基质，并有接触抑制现象 ③ 正常二倍体细胞的生长寿命是有限的④ 动物细胞对周围环境十分敏感⑤动物细胞对培养基的要求高 动物细胞培养基大致可以分成3类： 天然培养基 在细胞培养的早期阶段人们多采用该类材料做培养基，如血浆凝块、血清、淋巴液、胚胎浸液以及羊水、腹水等。 合成培养基 成分明确的化学试剂配制而成 。单纯采用这种合成培养基，细胞常常仍不能很好地增殖，甚至细胞都不能贴壁。因此在使用时常常需要加人一定量的动物血清，最常用的是添加5％～10%的小牛血清。在杂交瘤细胞的培养中，血清的要求更高，常需用10%～20％的胎牛血清。 无血清培养基 ⑥ 动物细胞蛋白修饰功能与细菌不同 动物细胞的蛋白质合成