激光通过内源性转化生长因子引导牙干细胞分化.docxVIP

内源性潜在转化生长因子-β1的光激活引导（direct）牙干细胞分化再生干细胞生物学领域的快速进展使得再生医学界最近做了许多利用干细胞充当治疗因子的尝试。但是，目前大多数再生途径所用的体外活体细胞操作技术，在临床转化方面，有一系列技术和管理上的障碍，而即使是用外源因子诱导组织内干细胞分化这种较为简单的途径，也会带来显著的不想要的（off-target）副作用。我们发现非电离的低能量激光（LPL）可以代替其它途径，充当一种侵袭性最小的活化工具，以激活一种内源性潜在转化生长因子复合物——转化生长因子β1（TGF-β1），从而让宿主干细胞继发性分化，促进组织再生。LPL处理可以产生活性氧（ROS）并呈剂量依赖关系，这一过程通过（LAP253位上的）一个特殊的蛋氨酸残根依次激活潜在TGF-β1（LTGF-β1）。激光激活的TGF-β1足以使离体人类牙干细胞分化。更进一步的是，小鼠牙盖髓模型显示在LPL处理后，牙本质再生的速度显著提高。在TGF-β受体Ⅱ（TGF-βRⅡ）被条件性敲除（DSPPCreTGF-βRⅡfl/fl）的小鼠或被给予了TGF-βRⅠ抑制剂的野生型小鼠中，上述活体结果是被剥夺的。这些发现提示TGF-β在介导LPL诱导的牙组织再生方面起着枢纽作用。更广义地说，这项工作勾勒出了用光激活内源性信号（cue）控制体内干细胞，从而应用于临床再生医学的实践基础。INTRODUCTION再生医学界最近致力于将干细胞引导分化成特定谱系的功能性细胞，这种功能性细胞可以促进组织的修复和机化。干细胞治疗在治疗很多疾病方面极有诱惑力，包括牙科疾病（例如蛀牙以及牙龈病），这属于目前最普遍的健康问题。目前临床的牙科的主要关注点在恢复性方法，涉及到植入材料的放置。但组织再生是一个很有吸引力的选项，因为单纯的材料会随着时间而衰退，并且也不能提供组织的全部功能（1）。目前已经探索了诱导干细胞行为的一些不同的生物学及生物工程学途径。干细胞疗法临床应用的典型例子就是培养特定患者的细胞，然后将其重新诱导成特定的结构上的一部分。与之相比，外源性形态产生素可能进入组织，使固有的干细胞动员，并促使其产生特定生物学功能。无论是哪种情况，外源性材料必须按严格的空间和时间限制规则进入身体，这种限制对其临床推广产生了显著的技术，调控，经济以及生物学上（副作用）的障碍（2）。通过激活内源性形态产生素从而命中固有干细胞池，这种方法有可能绕开再生医学现行途径中的许多限制，造成这一领域的革命（3）。在这些内源性因子中，具有生理作用的潜在生长因子复合物，例如转化生长因子β（TGF-β）超家族的成员们，可以充当强有力的信号。TGF-β作为一种潜在复合物分泌，它的活化是其生理功能中的关键步骤（4）。TGF-β超家族是由23个不同的基因编码的，包括TGF-β，骨成型蛋白（BMP），活化素，枢纽蛋白（Nodal），抑制素，以及生长分化因子（GDF）（5，6）它们在调控干细胞多能性和分化方面的相互作用及其复合物背景依赖性作用，已经被各种实验模型很好地揭示了。近期的研究强调了TGF-β信号通路在干细胞分化过程中作为主要调节因子的角色（7，8）。通过对TGF-β受体Ⅰ（TGF-βRⅠ）的特异性抑制和继发性的谱系分化标志物表达的缺失从而实现对Oct4和Nanog表达的诱导，这一事实使人们认识到了TGF-β信号通路在干细胞多能性和分化方面的核心角色。除此之外，TGF-β超家族成员们在牙的发育中扮演着核心角色，特别是在本实验所用的模型的牙髓-牙本质的病理生理过程中，并且其还是牙髓再生中最有希望的信号之一。人们已经描述了潜在TGF-β（LTGF-β）的几种激活方法，包括极端的pH，温度，超声，整合蛋白的结合，电离辐射，以及诸如血小板反应蛋白（thrombospondin）-1这样的蛋白酶（14）。出于实践及安全上的考虑，这些TGF-β引发物在临床应用上有着不同的吸引力。光照是一种很吸引人的（激活）方法，但直到目前，对它的应用主要还是集中于它的摧毁性光毒性作用，例如杀死肿瘤细胞。与这些方法相比，人们已经注意到低能量激光（LPL）治疗可以减少疼痛和炎症，促进创口恢复，这类作用统称为光生物调节作用（15）。人们曾偶发性注意到LPL治疗对心脏、皮肤、肺以及神经组织的促再生作用（16）。已有资料提示这些再生反应是由发生在干细胞中的直接或间接作用所介导的（17-19），但激光治疗与干细胞生物学之间的直接联系尚不清楚。本文中，我们评估了LPL引导牙干细胞分化以进行牙本质再生的能力，并研究了这一过程中涉及到的详细的分子机制。LPL可能产生了活性氧簇（ROS，reactive oxygen species），ROS又接着通过潜在相关肽（LAP，latency-associated peptide）上一个特殊的蛋氨酸激活